TUNEL染色

TUNEL染色可檢測細(xì)胞在凋亡過程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況

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服務(wù)介紹
公司簡介

實(shí)驗(yàn)原理

TUNEL染色可檢測細(xì)胞在凋亡過程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況，其原理是標(biāo)記（熒光或者生物素）的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT Enzyme）的作用下,可以連接到凋亡細(xì)胞中斷裂的DNA的3‘－OH末端，再通過熒光激發(fā)或者化學(xué)顯色的方法，特異準(zhǔn)確地檢測發(fā)生凋亡的細(xì)胞，而正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。本實(shí)驗(yàn)適用于組織和細(xì)胞樣本的凋亡原位檢測。

實(shí)驗(yàn)方法

一、樣品處理

1、細(xì)胞樣品：自然晾干的細(xì)胞樣品固定；封閉；通透液促滲

2、冰凍樣本：PBS浸潤；封閉；通透液促滲

3、石蠟樣品：脫蠟及水化；微波或蛋白酶K修復(fù)；封閉

二、標(biāo)記反應(yīng)

1、熒光標(biāo)記：滴加TdT酶反應(yīng)液，反應(yīng)；熒光顯微鏡檢測

2、生物素標(biāo)記：滴加TdT酶工作液反應(yīng)；滴加Streptavidin-HRP工作液反應(yīng)；

DAB顯色；蘇木素復(fù)染；顯微鏡觀察拍照

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

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