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MTT技術(shù)服務(wù)

MTT技術(shù)服務(wù)


MTT技術(shù)服務(wù)
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MTT技術(shù)服務(wù)

MTT方法簡介:
四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT方法),是通過快速簡便的顏色反應(yīng)來檢測細(xì)胞存活數(shù)量。其原理是MTT可作為哺乳類動物細(xì)胞線粒體中琥珀酸脫氫酶的底物。當(dāng)有活細(xì)胞存在時,線粒體內(nèi)琥珀酸脫氫酶可將淡黃色的MTT還原成藍(lán)紫色的針狀甲月替(Formazan)結(jié)晶并沉積在細(xì)胞中,結(jié)晶物能被二甲基亞砜 (DMSO)溶解,用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其吸光度OD值,OD值的高低可間接反映活細(xì)胞的數(shù)量及其活性。

目前MTT法常用于以下幾個方面的研究:
1、檢測細(xì)胞活性:常作為細(xì)胞毒性試驗的一種方法。
2、體外藥物敏感實驗:該方法簡便、經(jīng)濟(jì)、快速,重復(fù)性好,所需的細(xì)胞數(shù)較少,沒有放射性,目前廣泛的用于臨床前的抗癌藥物的篩選研究。
3、一些細(xì)胞因子活性的研究

主要實驗步驟如下:
1)將對數(shù)生長期細(xì)胞用胰酶消化后配制成濃度為1-10×104個/ml的細(xì)胞懸液,按1000-10000個細(xì)胞/孔接種于96孔板,每孔加100μl。
2)將平板置37℃、 5%CO2濕度培養(yǎng)箱中24小時后,加入含有不同濃度受試樣本的培養(yǎng)液100μl,每個樣本不同濃度設(shè)平行的三個孔,對照組加不含樣本的培養(yǎng)液100μl,再放入培養(yǎng)箱中孵育24-72 小時,
3)用快速翻板法倒掉培養(yǎng)液,每孔加入用無血清1640按5mg/ml新鮮配制的MTT溶液100μl,溫育4小時,使MTT還原為甲 月替,再次倒掉上清液,每孔加DMSO(二甲基亞楓)200μl,用平板搖床搖勻后,使用酶標(biāo)儀測定光密度值(OD)(參考波長450nm,檢測波長570nm),以溶劑對照處理細(xì)胞為對照組,按下述公式計算化合物對細(xì)胞的抑制率,并按中效方程計算半數(shù)抑制濃度IC50:
  



客戶方需提供:
樣本描述,相關(guān)的實驗設(shè)計內(nèi)容如作用時間和樣本濃度等。

公司方提供:
實驗結(jié)果IC50值。

實驗周期與費用:
實驗費用以樣本數(shù)和細(xì)胞株的種類數(shù)目為單位計算,實驗周期為21個工作日,公司將在材料和預(yù)付的實驗經(jīng)費全部到位的工作日后30個工作日之內(nèi)提交實驗結(jié)果。客戶需在收到實驗結(jié)果后一周內(nèi)付清所有剩余款項。

收費標(biāo)準(zhǔn):

每個樣本,1株細(xì)胞的IC50值500元。

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