SNP篩查和鑒定--DHPLC法

DHPLC法 

特點(diǎn)：
Ø    擁有高端變性高壓液相色譜儀(WAVE 3500HT)等儀器設(shè)備，配備有國(guó)內(nèi)領(lǐng)先和國(guó)際一流水平的研究隊(duì)伍。
Ø    采用DNA樣品池法(將若干份PCR樣品混合在一起)，使得純合突變也能以雜合子形式得以撿出，極大提高了尋找未知SNPs的效率。
Ø    具有高通量檢測(cè)、自動(dòng)化程度高、靈敏度和特異性較高、檢測(cè)DNA片段和長(zhǎng)度變動(dòng)范圍廣、相對(duì)價(jià)廉等優(yōu)點(diǎn)
Ø    檢測(cè)所需的樣品量很少，PCR產(chǎn)物高于80ng就能滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求，且無(wú)需純化，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好
Ø    上機(jī)時(shí)間短，只需5~6min就可得出數(shù)據(jù)
Ø    根據(jù)峰圖可判斷是否有突變，但不能確定SNP的位置和類(lèi)型，需用標(biāo)準(zhǔn)樣品或結(jié)合測(cè)序驗(yàn)證

原理：
DHPLC基因突變篩查，就是利用離子對(duì)反向液相色譜技術(shù)，通過(guò)獨(dú)特的DNA分離基質(zhì)，對(duì)特定的PCR反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行分離。含有突變位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)變性、逐步降溫退火后，將形成同源和異源雙鏈（一條為突變鏈，另一條為正常鏈）兩種DNA分子.在部分變性條件下，發(fā)生錯(cuò)配的異源雙鏈DNA更易于解鏈為單鏈DNA，與DNAsep柱結(jié)合力降低，比同源雙鏈DNA分子更易于被乙腈洗脫下來(lái)，從而與同源雙鏈DNA分離.一般來(lái)說(shuō)，含變異成分的PCR產(chǎn)物將在DHPLC圖譜上比PCR非變異產(chǎn)物多1-2個(gè)峰型，因而兩者可以被鑒別.

實(shí)驗(yàn)流程：
Ø    DNA提取，設(shè)計(jì)引物并合成
Ø    PCR
Ø    上機(jī)檢測(cè)，數(shù)據(jù)采集以及分析
客戶(hù)提供：
Ø    準(zhǔn)確的基因名稱(chēng)和序列以及SNP位點(diǎn)信息
Ø    A、組織或血液樣品B、基因組DNA 樣品，需-20度保存和運(yùn)輸
Ø    純度要求：OD260/280在1.6~1.8之間；OD260/230在1.8~2.2之間
Ø    濃度要求( C) ：基因組DNA濃度大于100ng/µl     
Ø    DNA用量需求（ UL）：PCR反應(yīng)個(gè)數(shù)（N）* （M）/ （C）
Ø    單個(gè)PCR反應(yīng)量(M)：50ng
Ø    PCR產(chǎn)物大小在150~800bp之間，最好在300bp左右，里面不含礦物油、甲酰胺、高壓滅菌水、蛋白酶 K、牛血清白蛋白
Ø    為了提高 PCR 擴(kuò)增的保真性，最好選用 Pfu DNA 聚合酶

提供結(jié)果：
Ø    提供每個(gè)PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖片
Ø    提供電子版結(jié)果及實(shí)驗(yàn)流程
Ø    提供數(shù)據(jù)分析服務(wù)
Ø    實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及實(shí)驗(yàn)剩余的樣品和引物為客戶(hù)所有

收費(fèi)構(gòu)成（具體價(jià)格請(qǐng)咨詢(xún)）
Ø    DNA提取費(fèi)用
Ø    引物設(shè)計(jì)及合成費(fèi)用
Ø    PCR擴(kuò)增費(fèi)用
Ø    上機(jī)費(fèi)用
Ø    數(shù)據(jù)分析費(fèi)用