BrdU標記法檢測原代細胞增殖

BrdU標記法檢測原代細胞增殖

1．細胞以1.5×105/ml細胞接于直徑35ml培養(yǎng)皿中（內(nèi)放置蓋玻片），培養(yǎng)1天，用含0.4％ FCS培養(yǎng)液同步化3天，使絕數(shù)細胞處于G0期
2．終止細胞培養(yǎng)，加入BrdU（終濃度30μg/L），37℃，孵育40min。
3．棄培養(yǎng)液，玻片用PBS洗滌3次。
4．甲醇/醋酸固定10min。
5．經(jīng)固定的玻片空氣干燥，0.3％H2O2-甲醇30min滅活內(nèi)源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封閉。
7．甲酰胺100℃，5min變性核酸。
8．冰浴冷卻后PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。
9．按ABC法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數(shù)10高倍視野中細胞總數(shù)及BrdU陽性細胞數(shù)，計算標記指數(shù)（LI）。