飼養(yǎng)層細胞共培養(yǎng)體外擴增原代CD34+細胞

飼養(yǎng)層細胞共培養(yǎng)體外擴增原代CD34+細胞

試劑和材料：
1. MSCs培養(yǎng)基；
2. 6孔培養(yǎng)板；
3. 絲裂霉素C，100μg/ml；
4. 共培養(yǎng)的培養(yǎng)基：IMDM添加10%FBS，100U/ml青霉素和100μl/ml鏈霉素；
5. 細胞因子（干細胞因子，IL-6，F(xiàn)lt-3配體，促血小板生成素）；

實驗方法：
1. 將臍帶血來源的間充質(zhì)干細胞（CB-MSCs）作為飼養(yǎng)層細胞，用MSCs培養(yǎng)基重懸CB-MSCs，細胞濃度為5×104個細胞/ml；
2. 將CB-MNCs接種到6孔板；
3. 每周兩次半量更換新鮮培養(yǎng)基；
4. 當CB-MNCs達到90%以上匯合時，用10μg/ml絲裂霉素C處理，37℃ 2.5h；
5. 用無血清IMDM將CB-MNCs洗兩遍；
6. 按1×104/ml CD34+細胞重懸于含細胞因子的共同培養(yǎng)基（100ng/ml干細胞因子，100ng/ml IL-6，50ng/ml Flt-3配體，10ng/ml促血小板生成素）；
7. 將CD34+細胞接種到CB-MSCs飼養(yǎng)層細胞上；
8. 每周兩次更換1/4培養(yǎng)基；
9. 2周后，收集未貼壁細胞；