細(xì)胞凍存和復(fù)蘇

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇

一、細(xì)胞凍存

細(xì)胞低溫冷凍貯存是細(xì)胞室的常規(guī)工作。細(xì)胞凍存與細(xì)胞傳代保存相比可以減少人力、經(jīng)費(fèi)，減少污染，減少細(xì)胞生物學(xué)特性變化。細(xì)胞凍存原則是慢凍快融。當(dāng)細(xì)胞冷到0℃以下，會(huì)造成細(xì)胞器脫水，細(xì)胞中可溶性物質(zhì)濃度升高，并在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶。如果緩慢冷凍，可使細(xì)胞逐步脫水，細(xì)胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶；相反，結(jié)晶就大，大結(jié)晶會(huì)造成細(xì)胞膜、細(xì)胞器的損傷和破裂。復(fù)蘇過(guò)程應(yīng)快融，目的是防止小冰品形成大冰品，即冰晶的重結(jié)晶。

在細(xì)胞凍存時(shí)加入低溫保護(hù)劑，能大大提高凍存效果。常用的低溫保護(hù)劑是DMSO，它是種滲透性保護(hù)劑，可迅速透入細(xì)胞，提高胞膜對(duì)水的通透性，降低冰點(diǎn)，延緩凍結(jié)過(guò)程，使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外，在胞外形成冰晶，減少胞內(nèi)冰晶，從而減少冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷。常用配方為2×凍存液(40％血清培養(yǎng)基+40％ 血清+20％DMSO)。

目前已經(jīng)有商業(yè)化無(wú)DMSO無(wú)血清細(xì)胞凍存液，它是一種化學(xué)成分確定、不含動(dòng)物源成分，也不含DMSO的凍存液�？芍苯邮褂�，無(wú)需梯度降溫。

二、細(xì)胞復(fù)蘇

細(xì)胞復(fù)蘇是將凍存在液氮中的細(xì)胞解凍后重新培養(yǎng)。細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程升溫要快，防止在解凍過(guò)程中水分進(jìn)入細(xì)胞，形成冰晶，影響細(xì)胞存活。具體步驟：從液氮中取出冷凍管，迅速投入37℃水浴中，使其融化(1分鐘左右)。5分鐘內(nèi)用培養(yǎng)液稀釋至原體積的10倍以上，800rpm低速離心10分鐘，去上清，加新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)剛復(fù)蘇的細(xì)胞。