貼壁細(xì)胞處理方法

                                貼壁細(xì)胞處理方法
一、           細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。從細(xì)胞資源中心獲得細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作。
二、           鏡下觀察：
未超過80%匯合度時，將瓶裝的完全培養(yǎng)液移入無菌瓶中，留待日后培養(yǎng)用，原瓶（T25瓶）保留6-8ml完全培養(yǎng)液，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；
超過80%匯合度時，按要求比例消化傳代。
三、消化方法
1、將瓶裝的完全培養(yǎng)液移入無菌瓶中，留待日后培養(yǎng)用。加消化液0.25%Trypsin-EDTA (1X), Phenol Red消化。
2、T25瓶加3ml PBS，洗一次，棄上清，再加1ml消化液消化，顯微鏡下觀察，等細(xì)胞完全脫離瓶壁分離成單個后，加培養(yǎng)基混勻，離心收集，按要求分瓶（視細(xì)胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6， 1:6-1:8），每T25瓶加培養(yǎng)基至6-8ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。
 
該細(xì)胞使用培養(yǎng)基：1、DMEM(高糖)    2、R1640    3、R1640（改良）4、MEM(EBSS)    5、MEM(NEAA)    6、D/F12    7、F12    8、F12K    9、MaCcoy‘5A    10、L15   
 
血清要求：1、20%FBS   2、15%FBS   3、10%FBS   4、5%FBS   5、2.5%FBS   6、15%HS   7、10%HS   8、5%HS   9、2.5%HS   10、10%CCF(滅活)
 
凍存液：常規(guī)培養(yǎng)液60%  FBS30%  DMSO 10%