AW264.7細(xì)胞培養(yǎng)注意事項

常見問題：

1.該細(xì)胞對培養(yǎng)基及血清的質(zhì)量要求較高，其中任何一個質(zhì)量不好都會導(dǎo)致后續(xù)培養(yǎng)過程中細(xì)胞的分化，特別是傳3、4代以后細(xì)胞容易出現(xiàn)分化，細(xì)胞變大，貼壁較緊，呈典型“攤雞蛋”樣；

2.該細(xì)胞在傳代或復(fù)蘇后，剛貼壁時會有短小的突觸，但細(xì)胞胞體還是呈圓形或近圓形；待細(xì)胞培養(yǎng)2-3天后，短小突觸會消失；

3.如果用胰酶消化，經(jīng)驗不足時，極易導(dǎo)致后續(xù)細(xì)胞形態(tài)的改變，也不容易將細(xì)胞消化下來；

4.如果用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下來，容易導(dǎo)致大量細(xì)胞死亡和細(xì)胞形態(tài)的改變，也不容易分散為單細(xì)胞；

5.該細(xì)胞不管在任何密度下，只要是更換了新鮮培養(yǎng)基后緊接著進(jìn)行吹打，細(xì)胞會很難從培養(yǎng)瓶壁上脫落。

推薦的傳代方法有以下兩種：

方法一：該細(xì)胞在細(xì)胞密度較大，培養(yǎng)基較黃時，不要去除舊培養(yǎng)基，用移液管直接對培養(yǎng)瓶壁上的細(xì)胞進(jìn)行吹打，使細(xì)胞從壁上脫落。細(xì)胞脫落后可加入新鮮的完全培養(yǎng)基混勻后分瓶；也可收集培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞懸液，離心后，，棄上清，再用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后分瓶，進(jìn)行培養(yǎng)。這種方法容易出現(xiàn)的問題是，如果操作者經(jīng)驗不足，可能導(dǎo)致部分細(xì)胞無法脫落。

方法二：細(xì)胞密度達(dá)到80～90%，需要進(jìn)行傳代時，可在培養(yǎng)瓶中的原培養(yǎng)基中滴加1～2滴無菌的HEPES緩沖液（視培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基的體積適當(dāng)可以增加HEPES*的用量），作用1～2min，使培養(yǎng)基PH變酸，培養(yǎng)基顏色變黃，直接用移液管進(jìn)行吹打，這時細(xì)胞會很輕易脫落，并成單細(xì)胞。細(xì)胞脫落后可加入新鮮的完全培養(yǎng)基混勻后分瓶；也可收集培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞懸液，離心后，棄上清，再用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后分瓶，進(jìn)行培養(yǎng)。