三種神經干細胞（NSC）的鑒定方法

神經干細胞（NSC）是多能干細胞，可以分化為神經系統(tǒng)的多種細胞，包括神經元、星形膠質細胞、少突膠質細胞等等。神經干細胞可以從哺乳動物大腦的不同區(qū)域和脊髓等神經系統(tǒng)中分離出來，具有重建神經環(huán)路、修復神經組織等能力，因此，神經干細胞在神經退行性疾病動物模型、遺傳性中樞神經系統(tǒng)疾病、中風和脊髓損傷等方面有著廣泛的研究價值。

那么，當我們從神經組織中分離出原代細胞，并進行純化后，如何鑒定其中的細胞就是神經干細胞呢？無獨有偶，神經干細胞也可以從形態(tài)學特征、特異性抗原表達和分化潛能三方面進行判斷。
 

1. 形態(tài)學特征

神經干細胞可做懸浮培養(yǎng)，在生長過程中細胞呈聚球生長。從細胞形態(tài)來看，細胞團無或有較短的突起，形態(tài)上與其他種類的細胞沒有明顯的差異。當然，神經干細胞也可進行貼壁培養(yǎng)。
 

神經干細胞懸浮培養(yǎng)
 

2. 特異性抗原表達

特異性抗原表達是神經干細胞鑒定中的一項重要指標，可以利用免疫熒光檢測對其分子標志物進行驗證。例如，巢蛋白（Nestin）的表達被視為神經干細胞最具代表性的標志物，它在神經胚胎形成時開始表達，隨著神經干細胞的遷移和分化的完成，表達量逐漸下降甚至完全停止。

β3-Tubulin是神經元的結構蛋白，作為神經元標志物，β3-Tubulin陽性是鑒定神經元的必要條件。GFAP是星形膠質細胞的特異性標志物，少突膠質細胞的標志物是GalC或OSP。

神經干細胞特異性抗原表達鑒定的一般標準為：

★ Nestin 陽性表達率≥75%；

★ β3-Tubulin陽性表達率 ≤10%；

★ GFAP陽性表達率≤10%；

★ GalC或OSP陽性表達率≤10%。

神經干細胞免疫熒光染色鑒定
 

Nestin染色陽性，GFAP、Tubulin染色陰性，表明該細胞為神經干細胞。

3. 分化潛能

神經干細胞具有良好的分化潛能，能向神經元、少突膠質細胞、星形膠質細胞等自發(fā)分化或誘導分化。

①  自發(fā)分化
神經干細胞在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)大概7天，會自發(fā)分化為神經元細胞 （16±7%）、 星形膠質細胞 （75±7%） 、少突膠質細胞（5±3%），此時可表達β3-Tubulin、GFAP、GalC或OSP標志物。如GFAP高表達而Nestin低表達，則可判定該細胞為星形膠質細胞。

②  誘導分化
除了自發(fā)分化，神經干細胞可在特定培養(yǎng)條件下向誘導方向分化，如神經元方向分化、少突膠質細胞分化。用誘導液誘導神經干細胞成神經元方向分化，可使分化比例升至60%以上。一旦神經干細胞分化為神經元和膠質細胞，Nestin便停止表達。

神經干細胞誘導分化免疫熒光染色鑒定

GFAP染色陽性，Hochest復染細胞核陽性，2組染色結果表明該細胞誘導后為星形膠質細胞。

Tubulin染色陽性，Hochest復染細胞核陽性，2組染色結果表明該細胞誘導后為神經元細胞。

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