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三種神經干細胞(NSC)的鑒定方法

瀏覽次數(shù):2895 發(fā)布日期:2021-7-28  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

神經干細胞(NSC)是多能干細胞,可以分化為神經系統(tǒng)的多種細胞,包括神經元、星形膠質細胞、少突膠質細胞等等。神經干細胞可以從哺乳動物大腦的不同區(qū)域和脊髓等神經系統(tǒng)中分離出來,具有重建神經環(huán)路、修復神經組織等能力,因此,神經干細胞在神經退行性疾病動物模型、遺傳性中樞神經系統(tǒng)疾病、中風和脊髓損傷等方面有著廣泛的研究價值。

那么,當我們從神經組織中分離出原代細胞,并進行純化后,如何鑒定其中的細胞就是神經干細胞呢?無獨有偶,神經干細胞也可以從形態(tài)學特征、特異性抗原表達和分化潛能三方面進行判斷。
 


 

1. 形態(tài)學特征

神經干細胞可做懸浮培養(yǎng),在生長過程中細胞呈聚球生長。從細胞形態(tài)來看,細胞團無或有較短的突起,形態(tài)上與其他種類的細胞沒有明顯的差異。當然,神經干細胞也可進行貼壁培養(yǎng)
 

神經干細胞懸浮培養(yǎng)
 

 

2. 特異性抗原表達

特異性抗原表達是神經干細胞鑒定中的一項重要指標,可以利用免疫熒光檢測對其分子標志物進行驗證。例如,巢蛋白(Nestin)的表達被視為神經干細胞最具代表性的標志物,它在神經胚胎形成時開始表達,隨著神經干細胞的遷移和分化的完成,表達量逐漸下降甚至完全停止。

β3-Tubulin是神經元的結構蛋白,作為神經元標志物,β3-Tubulin陽性是鑒定神經元的必要條件。GFAP是星形膠質細胞的特異性標志物,少突膠質細胞的標志物是GalC或OSP。

神經干細胞特異性抗原表達鑒定的一般標準為:

 Nestin 陽性表達率≥75%;

 β3-Tubulin陽性表達率 ≤10%;

 GFAP陽性表達率≤10%;

 GalC或OSP陽性表達率≤10%。

 

神經干細胞免疫熒光染色鑒定
 

Nestin染色陽性,GFAP、Tubulin染色陰性,表明該細胞為神經干細胞。

 

3. 分化潛能

神經干細胞具有良好的分化潛能,能向神經元、少突膠質細胞、星形膠質細胞等自發(fā)分化或誘導分化。

①  自發(fā)分化
神經干細胞在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)大概7天,會自發(fā)分化為神經元細胞 (16±7%)、 星形膠質細胞 (75±7%) 、少突膠質細胞(5±3%),此時可表達β3-Tubulin、GFAP、GalC或OSP標志物。如GFAP高表達而Nestin低表達,則可判定該細胞為星形膠質細胞。

②  誘導分化
除了自發(fā)分化,神經干細胞可在特定培養(yǎng)條件下向誘導方向分化,如神經元方向分化、少突膠質細胞分化。用誘導液誘導神經干細胞成神經元方向分化,可使分化比例升至60%以上。一旦神經干細胞分化為神經元和膠質細胞,Nestin便停止表達。

 

神經干細胞誘導分化免疫熒光染色鑒定

GFAP染色陽性,Hochest復染細胞核陽性,2組染色結果表明該細胞誘導后為星形膠質細胞。

 

Tubulin染色陽性,Hochest復染細胞核陽性,2組染色結果表明該細胞誘導后為神經元細胞。


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發(fā)布者:賽業(yè)(蘇州)生物科技有限公司
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