細胞劃痕實驗的原理、步驟及注意事項介紹
一、實驗原理
細胞劃痕（wound healing）法是簡捷測定細胞遷移遠動和修復能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細胞上，用微量槍頭或其它硬物在細胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細胞至實驗設定的時間，取出細胞培養(yǎng)板，觀察周邊細胞的生長遷移能力，實驗通常需設定正常對照組和實驗組，實驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別，通過不同分組之間的細胞對于劃痕區(qū)修復能力的不同可以判斷各組細胞的遷移與修復能力。
二、實驗步驟
1.所有要滅菌，直尺和 marker 筆在操作前紫外照射 30min。
2.先用 marker 筆在 6 孔板背后，用直尺比著，大約每隔 0.5-1cm 一道，橫穿過孔，每孔至少穿過 5 條線。
3.在空中加入約 5×105 個細胞（具體數(shù)量因細胞不同而不同，掌握為過夜能鋪滿），37°C 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
4.第二天用 10µl 槍頭比著直尺，與標記線垂直的方向劃兩條平行線，槍頭要垂直，不能傾斜。
5.用 PBS 洗細胞 3 次，去除劃下的細胞，加入無血清培養(yǎng)基。
三、注意事項
1.在用 PBS 緩沖液沖洗時，注意貼壁慢慢加入，以免沖散單層貼璧細胞，影響實驗拍照結果。
2.一般做劃痕實驗，都是無血清或者低血清(<2%），否則細胞增殖就不能忽略。（也可用絲裂酶處理一小時）
3.按照 6 孔板背后畫線的垂直方向劃痕，可以形成者干交叉點，作為固定的檢測點，以解決前后觀察時位置不固定的問題。
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