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逐典Chaselection-重組胰蛋白酶使用常見問題答疑

瀏覽次數(shù):1007 發(fā)布日期:2023-12-26  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

Q1:逐典重組胰蛋白酶配置是否需要過濾?

A1:需要使用0.22μm濾膜除菌過濾,這個(gè)在母液配置和工作液(即稀釋后)的配置中都是需要的。


Q2:逐典重組胰酶產(chǎn)品是否是無菌產(chǎn)品?

A2:不是無菌產(chǎn)品,產(chǎn)品COA中是微生物限度標(biāo)準(zhǔn)為100CFU,所以在配置使用前需要進(jìn)行無菌過濾。


Q3:逐典重組胰蛋白酶的配置有哪些環(huán)節(jié)?分幾步?

A3:重組胰酶從干粉到能直接使用的工作液需要兩大環(huán)節(jié)。第一步:需要配置成低PH的母液,除菌過濾;第二步:再進(jìn)行中性緩沖液稀釋,過濾除菌后就能直接使用了。


Q4:逐典重組胰酶的主要優(yōu)點(diǎn)是那些?

A4:非動(dòng)物來源、GMP環(huán)境生產(chǎn)、高酶活、高穩(wěn)定性。


Q5:逐典重組胰酶的建議使用濃度是多少?

A5:配置母液的濃度是10 mg/ml,配置工作液濃度是0.5 mg/ml。


Q6:逐典重組胰酶產(chǎn)品如何保存?干粉?母液?工作液?

A6:一般來說,我們的干粉產(chǎn)品 -20℃保存 2年沒有問題, 配成母液-20℃保存 1年沒有問題,工作液的話-20℃保存 1-3個(gè)月沒有問題,臨時(shí)用放在4℃可保存一周內(nèi),但還是建議客戶現(xiàn)用現(xiàn)配。


Q7:消化細(xì)胞的胰酶是不是濃度越高越好?

A7:不是的,一般來說消化細(xì)胞會(huì)有一個(gè)最佳胰酶濃度,達(dá)到最適濃度后濃度升高會(huì)傷害細(xì)胞。


Q8:細(xì)胞消化時(shí)間長是不是意味著胰酶產(chǎn)品性能不行?

A8:一般的細(xì)胞消化時(shí)間3-5min都是很正常的,難消化的細(xì)胞10-15min也是存在的。 細(xì)胞消化時(shí)間長短不能完全決定產(chǎn)品性能,產(chǎn)品的比活、活性、級(jí)別、生產(chǎn)技術(shù)、以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等因素都是評(píng)判產(chǎn)品性能的條件。


Q9:如何控制胰酶消化時(shí)間?

A9:不同細(xì)胞對(duì)消化液的敏感性不同,胰酶消化的時(shí)間也會(huì)有差異。胰酶消化時(shí)間與胰酶的濃度,是否含EDTA,胰酶的儲(chǔ)存時(shí)間,胰酶的儲(chǔ)存溫度,是否反復(fù)凍融,消化加入的胰酶體積,消化溫度及細(xì)胞的密度有關(guān)。


Q10:新細(xì)胞如何使用胰酶消化?

A10:消化對(duì)于新購買的細(xì)胞,建議客戶先用低濃度的胰酶仔細(xì)去摸索一下消化時(shí)間,可每隔1分鐘鏡下觀察細(xì)胞是否變圓,記錄最佳消化時(shí)間,下一次操作參考之前的記錄來控制時(shí)間即可。


Q11:使用胰蛋白酶的時(shí)候加入EDTA是為什么?

A11: EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前,用EDTA清洗細(xì)胞,以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價(jià)離子。

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