原代細胞免疫熒光鑒定步驟【賽百慷】

為了更好的幫助客戶提供真實的原代細胞，使用免疫熒光鑒定出提取的細胞類型，免疫熒光技術(shù)又稱熒光抗體技術(shù)，是標記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術(shù)的基礎上建立起來的一項技術(shù)。該技術(shù)的主要特點是：特異性強、敏感性高、速度快。 一下是賽百慷技術(shù)人員提供的免疫熒光細胞鑒定的步驟，僅做參考：

1.細胞爬片

取4片玻璃片于24孔板中，每孔加入培養(yǎng)基1mL，加入細胞0.02million個/孔。置培養(yǎng)箱2h或過夜。

2.固定

細胞爬片后，吸出培養(yǎng)基，用PBS洗一遍，加入4% PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可最后一次不吸出PBS，放4℃過夜。

3.破膜封閉

將玻片除去水分，置于培養(yǎng)皿支撐物上，玻璃片封閉液配置：0.5% Trition X-100與PBS 1:1混合，再加10% 血清，取50uL破膜封閉液滴于防水膜上，將玻片上有細胞的一面蓋上2h。

4.一抗孵育
一抗配置：抗體與PBS 1:100（200）稀釋
破膜后，取50uL一抗于防水膜上（濕盒中），將玻片有細胞的一面蓋上置于4℃（最多可放置一周）
陰性對照組可用PBS代替一抗。

5.二抗孵育
PBS洗3×5min/次，
二抗混合液配置：二抗：PBS=1:500
DAPI:PBS=1:1000
防水膜上滴50uL二抗混合液，蓋上玻片，避光，室溫放置2h。

6.包埋
PBS洗3×5min/次，玻片上各滴1滴Fluoromount-G，將有細胞的一面蓋上。