肝臟去唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)的結(jié)構(gòu)、功能及臨床應(yīng)用

引言

肝臟去唾液酸糖蛋白受體（ASGPR）最初由Ashwell及其團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)，因其能夠迅速清除血液中末端為β-1,4鏈半乳糖的寡糖糖蛋白而被識(shí)別和定義。ASGPR的主要生理功能是介導(dǎo)血液中去唾液酸糖蛋白、脂蛋白等物質(zhì)的清除，并與病毒性肝炎、肝硬化、肝癌等肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。ASGPR的發(fā)現(xiàn)及其臨床應(yīng)用為肝臟疾病的診斷和治療提供了重要工具。

近年來(lái)，各國(guó)學(xué)者對(duì)ASGPR的研究取得了顯著進(jìn)展，進(jìn)一步提升了其臨床應(yīng)用價(jià)值。

ASGPR的結(jié)構(gòu)、基因與生理功能

結(jié)構(gòu)
ASGPR，又稱肝凝集素，是一種異源低聚物內(nèi)吞受體，主要位于肝細(xì)胞竇狀隙側(cè)的質(zhì)膜表面。ASGPR屬于II型跨膜受體，包含四個(gè)功能區(qū)：胞質(zhì)區(qū)、跨膜區(qū)、莖區(qū)和糖識(shí)別域（CRD）。CRD屬于C型（鈣依賴）凝集素超家族，能夠特異性結(jié)合去唾液酸的非還原半乳糖殘基和N-乙酰半乳糖胺，是ASGPR功能的核心部分。

基因
ASGPR可通過(guò)傳統(tǒng)親和層析法純化。從兔肝中分離出40 kDa和48 kDa兩種蛋白質(zhì)（比例為2:1），而從大鼠肝臟中分離出42 kDa、49 kDa和54 kDa三種蛋白質(zhì)（比例為8:1:1）。人肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞中僅分離出單一46 kDa的蛋白質(zhì)。人HepG2細(xì)胞中存在兩種ASGPR蛋白（H1和H2），其mRNA表達(dá)量相近，但翻譯比例為主次形式（2～5:1）。H1亞基包含約40個(gè)氨基酸的N端胞質(zhì)區(qū)、20個(gè)氨基酸的跨膜區(qū)、80個(gè)氨基酸的胞外莖區(qū)以及140個(gè)氨基酸的CRD。

生理功能
ASGPR在肝細(xì)胞質(zhì)膜上大量表達(dá)，并具有快速內(nèi)化能力，使其在清除血液中糖蛋白方面具有巨大潛力。ASGPR的天然配體包括去唾液酸血清類黏蛋白（ASOR）、去唾液酸銅藍(lán)蛋白和去唾液酸運(yùn)鐵蛋白等。ASGPR通過(guò)識(shí)別半乳糖殘基或N-乙酰半乳糖胺介導(dǎo)ASOR的清除，這一過(guò)程具有高度特異性。

ASGPR的所有亞基均參與配體結(jié)合功能。在H2亞基缺失的情況下，H1亞基雖能正常轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞表面，但無(wú)法結(jié)合ASOR；而僅有H2亞基表達(dá)的ASGPR會(huì)被迅速降解，無(wú)法到達(dá)質(zhì)膜。H1亞基的表達(dá)是H2亞基有效轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞表面的前提。

ASGPR在肝臟疾病中的作用
ASGPR的數(shù)量和活性可反映肝細(xì)胞功能狀態(tài)。在肝炎、酒精性肝病和肝癌等疾病中，ASGPR的數(shù)量和活性均受到損害。受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用可能是毒性誘導(dǎo)肝損傷的新機(jī)制，適當(dāng)?shù)腁SGPR功能對(duì)肝損傷具有保護(hù)作用。通過(guò)監(jiān)測(cè)ASGPR的數(shù)量和活性變化，可預(yù)測(cè)術(shù)后肝功能代償情況。例如，李勤濤等利用ASGPR及臨床指標(biāo)建立了肝儲(chǔ)備功能定量評(píng)估系統(tǒng)。

1. 乙型病毒性肝炎
HBV顆粒能與HepG2細(xì)胞結(jié)合，而阻斷ASGPR功能可顯著抑制這一過(guò)程。HBV preS1相關(guān)的病毒膜結(jié)合位點(diǎn)與ASGPR結(jié)合，使病毒通過(guò)ASGPR進(jìn)入肝細(xì)胞。preS1與ASGPR在細(xì)胞膜上的表達(dá)區(qū)域重疊，且表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)（Pearson相關(guān)系數(shù)為0.776，P＜0.0001），表明ASGPR可能是HBV進(jìn)入宿主細(xì)胞的關(guān)鍵結(jié)合伴侶。此外，ASGPR與HBV抗體形成的復(fù)合物可誘發(fā)自身免疫反應(yīng)，促進(jìn)急性乙型肝炎向慢性轉(zhuǎn)化，加重組織損傷。ASGPR H1亞基的CRD也是甲型肝炎病毒和馬爾堡病毒的入侵位點(diǎn)。

2. 慢性酒精性肝病
酒精性肝損傷與ASGPR含量降低密切相關(guān)。酒精干預(yù)可損害ASGPR的內(nèi)吞過(guò)程，降低配體結(jié)合、內(nèi)化和降解能力。在乙醇飼養(yǎng)的大鼠肝細(xì)胞中，ASGPR的配體結(jié)合、內(nèi)吞和降解作用減少45%～50%。慢性酒精干預(yù)還降低了ASGPR的mRNA水平，導(dǎo)致其數(shù)量顯著減少，并增加肝細(xì)胞凋亡敏感性，最終發(fā)展為脂肪肝。

3. 原發(fā)性肝癌
組織微陣列技術(shù)檢測(cè)顯示，ASGPR在正常肝組織和不同分化程度的肝細(xì)胞癌（HCC）中的表達(dá)模式存在顯著差異。高分化HCC的ASGPR表達(dá)水平與正常肝組織相似，而中低分化HCC的ASGPR表達(dá)水平顯著降低。ASGPR在T細(xì)胞介導(dǎo)的肝損傷中具有保護(hù)作用，其缺乏會(huì)增強(qiáng)T細(xì)胞介導(dǎo)的肝炎敏感性。此外，ASGPR在血管性血友病和鏈球菌肺炎敗血癥中也有一定作用。

ASGPR的基因及藥物靶向研究
ASGPR因其跨膜引入大分子的能力，成為肝細(xì)胞或肝癌細(xì)胞靶向治療的首選目標(biāo)。例如，乙酰半乳糖胺共軛的siRNA分子可特異性聚集在肝細(xì)胞中，驗(yàn)證了ASGPR的靶向性。Coulstock等將IFN-α融合至ASGPR特異性抗體上，合成的融合蛋白（mIFNα2-ASGPR dAb）顯著增強(qiáng)了肝臟靶向性，減少了干擾素對(duì)血液和周邊組織的暴露，提高了治療的安全性和耐受性。Zhao等將蜂毒素與抗ASGPR的單鏈可變片段抗體結(jié)合，構(gòu)建了重組免疫毒素，用于肝腫瘤細(xì)胞的靶向溶解。

此外，脂質(zhì)魚精蛋白DNA（LPDs）和靶向性陽(yáng)離子納米粒子系統(tǒng)（如PLGA-DOTAP-AF）等新型遞送系統(tǒng)也被開發(fā)用于肝細(xì)胞靶向基因治療。這些系統(tǒng)具有高效基因傳送能力，為肝臟疾病的治療提供了新途徑。

ASGPR應(yīng)用的前景與展望
ASGPR作為肝臟定向轉(zhuǎn)移的最佳受體，為肝臟疾病的治療、肝功能檢測(cè)和基因定向表達(dá)提供了重要工具。ASGPR顯影技術(shù)可用于評(píng)估肝功能，預(yù)測(cè)手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)并制定治療方案，但其顯影劑在穩(wěn)定性和組織通透性方面仍需改進(jìn)。

盡管ASGPR靶向基因藥物在肝臟疾病治療中取得了突破性進(jìn)展，但其復(fù)合物的制備仍存在大小和濃度等限制。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，這些問(wèn)題有望逐步解決，ASGPR及其介導(dǎo)的基因和藥物轉(zhuǎn)移技術(shù)將具有廣闊的應(yīng)用前景。

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