細胞培養(yǎng)中的污染鑒別與防治策略總結(jié)
細胞污染是細胞培養(yǎng)過程中常見的問題，可能會產(chǎn)生多種嚴重后果。細胞培養(yǎng)中的污染主要包括細菌、真菌、霉菌、支原體和黑膠蟲等類型。不同類型的污染有不同的特征和處理方法。以下是列舉的幾種污染的常見類型：
1、細菌污染
細菌污染是細胞培養(yǎng)中最常見的污染類型，因其生長迅速，肉眼和顯微鏡下均較易識別。細菌污染特點通常表現(xiàn)為：
培養(yǎng)基變化：細菌污染在培養(yǎng)物感染后幾天內(nèi)就很容易被肉眼觀察到；受感染的培養(yǎng)物通常會發(fā)黃并變得渾濁，經(jīng)常還會出現(xiàn)培養(yǎng)基的pH值突然下降的情況。
顯微鏡觀察：細菌污染的細胞在顯微鏡下呈現(xiàn)黑色細條沙狀，細菌的直徑通常只有幾微米，其形狀多樣，如球狀、桿狀和螺旋狀等。在低倍顯微鏡下，細菌以細小顆粒的形式出現(xiàn)在細胞之間，在高倍顯微鏡下觀察可以分辨出單個細菌的形狀。
異味：伴隨異樣氣味，有時表面會有一層薄膜。
對細胞影響：細菌污染的細胞生長速度緩慢，形態(tài)逐漸變圓直至死亡。
處理措施：
丟棄污染的細胞：一旦發(fā)現(xiàn)細菌污染，丟棄污染的細胞，避免進一步擴散。
環(huán)境清理：對細胞房（中喬新舟細胞房抑菌劑貨號：CSP011）、培養(yǎng)箱（中喬新舟培養(yǎng)箱抑菌劑貨號：CSP092）、培養(yǎng)箱水盤（中喬新舟培養(yǎng)箱水盤抑菌劑貨號：CSP091）、水浴鍋（中喬新舟水浴鍋抑菌劑貨號：CSP010）、超凈臺和實驗器具進行徹底消毒，使用75%酒精擦拭表面，必要時使用紫外線照射。
2、真菌污染
真菌污染比細菌污染更難早期發(fā)現(xiàn)，因為培養(yǎng)基通常保持清亮透明，培養(yǎng)液一般不會變渾濁，但在顯微鏡下可以觀察到各種形狀的菌絲。低倍鏡下很容易觀察到苗絲，如絲狀、管狀、樹枝狀或鏈球狀等。培養(yǎng)液中通常會有肉眼可見的絮狀物。真菌污染后，細胞的生長速度會減慢，形態(tài)發(fā)生變化高倍鏡下可以見到鏈狀排列的菌珠污染嚴重時肉眼可見白色或黃色漂浮物。
處理措施:
1）丟棄污染細胞：即使細胞株珍貴，也建議立即丟棄，避免污染擴散。
2）全面消毒：對細胞房（中喬新舟細胞房抑菌劑貨號：CSP011）、培養(yǎng)箱（中喬新舟培養(yǎng)箱抑菌劑貨號：CSP092）、培養(yǎng)箱水盤（中喬新舟培養(yǎng)箱水盤抑菌劑貨號：CSP091）、水浴鍋（中喬新舟水浴鍋抑菌劑貨號：CSP010）、超凈臺和實驗器具進行徹底消毒，使用75%酒精或抗真菌溶液（中喬新舟抗真菌溶液貨號：CSP032）擦拭表面，必要時使用紫外線照射。并更換培養(yǎng)箱水盤中的水，加入適量硫酸銅以抑制真菌生長。
3、霉菌污染
霉菌污染與真菌污染類似，早期難以察覺。特征包括：
培養(yǎng)基變化：出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見細絲狀團狀漂浮物。多數(shù)來自實驗服，并且具有季節(jié)性，像現(xiàn)在這種長蘑菇的季節(jié)很容易污染這種菌類。
細胞影響：細胞生長緩慢，狀態(tài)變差，最終停止增殖。
霉菌污染的處理需格外謹慎：
丟棄污染細胞：不要嘗試挽救，以免污染擴散到其他細胞株。
環(huán)境消毒：使用75%酒精徹底擦拭培養(yǎng)箱和超凈臺。對細胞房（中喬新舟細胞房抑菌劑貨號：CSP011）、培養(yǎng)箱（中喬新舟培養(yǎng)箱抑菌劑貨號：CSP092）、培養(yǎng)箱水盤（中喬新舟培養(yǎng)箱水盤抑菌劑貨號：CSP091）、水浴鍋（中喬新舟水浴鍋抑菌劑貨號：CSP010）、超凈臺和實驗器具進行徹底消毒，必要時使用紫外線照射。
預(yù)防措施：定期更換培養(yǎng)基和血清，保持實驗環(huán)境的低濕度，減少霉菌滋生。
4、支原體污染
支原體污染是細胞培養(yǎng)中最難檢測的污染類型之一，因其不引起明顯渾濁或pH變化。
顯微鏡觀察：顯微鏡下無法觀察到；
細胞影響：細胞生長速度明顯減慢，形態(tài)變得瘦長，出現(xiàn)“拉絲”現(xiàn)象，背景出現(xiàn)“小黑點”
檢測與處理措施：
檢測方法：使用PCR檢測或支原體檢測試劑盒（中喬新舟支原體快速檢測試劑盒（LAMP）貨號：CSP218和支原體檢測試劑盒貨號：ZQ505-K）確認污染。
處理方法：
· 對于普通細胞株，建議直接丟棄。
· 對于珍貴細胞株，可嘗試使用支原體清除試劑（中喬新舟支原體清除劑（升級版）貨號：CSP037）2個月可清除，但需嚴格監(jiān)控處理后的細胞狀態(tài)。
預(yù)防措施：定期檢測細胞株，保持無菌操作，如果擔心支原體污染可以提前預(yù)防（中喬新舟支原體高效預(yù)防試劑（200X）貨號：CSP201），使用高質(zhì)量培養(yǎng)基和血清。
5、黑膠蟲污染：
黑膠蟲污染在細胞培養(yǎng)中較為特殊，早期對細胞影響較小，但數(shù)量增加后會顯著干擾細胞生長。特征包括：
顯微鏡觀察：黑膠蟲在顯微鏡下呈現(xiàn)為黑色顆粒狀或片狀，通常在高倍鏡下觀察時，這些黑色顆粒會進行“布朗運動”。
培養(yǎng)基變化：培養(yǎng)液不會變得渾濁，但隨著培養(yǎng)時間的延長，小黑點的數(shù)量會逐漸增多。更換培養(yǎng)液或清洗細胞無法去除這些小黑點。但細胞狀態(tài)逐漸惡化。
處理措施：
專用清除劑：用黑膠蟲清除試劑盒（中喬新舟黑膠蟲清除試劑（200X）貨號：CSP093和黑膠蟲清除試劑（2000X）CSP214）可以去除。專門針對黑膠蟲的殺滅和抑制，效果顯著且對細胞無明顯毒性。
環(huán)境清潔：對培養(yǎng)箱和實驗器具進行徹底消毒，防止黑膠蟲再次滋生。
1、細菌污染
細菌污染是細胞培養(yǎng)中最常見的污染類型，因其生長迅速，肉眼和顯微鏡下均較易識別。細菌污染特點通常表現(xiàn)為：
培養(yǎng)基變化：細菌污染在培養(yǎng)物感染后幾天內(nèi)就很容易被肉眼觀察到；受感染的培養(yǎng)物通常會發(fā)黃并變得渾濁，經(jīng)常還會出現(xiàn)培養(yǎng)基的pH值突然下降的情況。
顯微鏡觀察：細菌污染的細胞在顯微鏡下呈現(xiàn)黑色細條沙狀，細菌的直徑通常只有幾微米，其形狀多樣，如球狀、桿狀和螺旋狀等。在低倍顯微鏡下，細菌以細小顆粒的形式出現(xiàn)在細胞之間，在高倍顯微鏡下觀察可以分辨出單個細菌的形狀。
異味：伴隨異樣氣味，有時表面會有一層薄膜。
對細胞影響：細菌污染的細胞生長速度緩慢，形態(tài)逐漸變圓直至死亡。
處理措施：
丟棄污染的細胞：一旦發(fā)現(xiàn)細菌污染，丟棄污染的細胞，避免進一步擴散。
環(huán)境清理：對細胞房（中喬新舟細胞房抑菌劑貨號：CSP011）、培養(yǎng)箱（中喬新舟培養(yǎng)箱抑菌劑貨號：CSP092）、培養(yǎng)箱水盤（中喬新舟培養(yǎng)箱水盤抑菌劑貨號：CSP091）、水浴鍋（中喬新舟水浴鍋抑菌劑貨號：CSP010）、超凈臺和實驗器具進行徹底消毒，使用75%酒精擦拭表面，必要時使用紫外線照射。
2、真菌污染
真菌污染比細菌污染更難早期發(fā)現(xiàn)，因為培養(yǎng)基通常保持清亮透明，培養(yǎng)液一般不會變渾濁，但在顯微鏡下可以觀察到各種形狀的菌絲。低倍鏡下很容易觀察到苗絲，如絲狀、管狀、樹枝狀或鏈球狀等。培養(yǎng)液中通常會有肉眼可見的絮狀物。真菌污染后，細胞的生長速度會減慢，形態(tài)發(fā)生變化高倍鏡下可以見到鏈狀排列的菌珠污染嚴重時肉眼可見白色或黃色漂浮物。
處理措施:
1）丟棄污染細胞：即使細胞株珍貴，也建議立即丟棄，避免污染擴散。
2）全面消毒：對細胞房（中喬新舟細胞房抑菌劑貨號：CSP011）、培養(yǎng)箱（中喬新舟培養(yǎng)箱抑菌劑貨號：CSP092）、培養(yǎng)箱水盤（中喬新舟培養(yǎng)箱水盤抑菌劑貨號：CSP091）、水浴鍋（中喬新舟水浴鍋抑菌劑貨號：CSP010）、超凈臺和實驗器具進行徹底消毒，使用75%酒精或抗真菌溶液（中喬新舟抗真菌溶液貨號：CSP032）擦拭表面，必要時使用紫外線照射。并更換培養(yǎng)箱水盤中的水，加入適量硫酸銅以抑制真菌生長。
3、霉菌污染
霉菌污染與真菌污染類似，早期難以察覺。特征包括：
培養(yǎng)基變化：出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見細絲狀團狀漂浮物。多數(shù)來自實驗服，并且具有季節(jié)性，像現(xiàn)在這種長蘑菇的季節(jié)很容易污染這種菌類。
細胞影響：細胞生長緩慢，狀態(tài)變差，最終停止增殖。
霉菌污染的處理需格外謹慎：
丟棄污染細胞：不要嘗試挽救，以免污染擴散到其他細胞株。
環(huán)境消毒：使用75%酒精徹底擦拭培養(yǎng)箱和超凈臺。對細胞房（中喬新舟細胞房抑菌劑貨號：CSP011）、培養(yǎng)箱（中喬新舟培養(yǎng)箱抑菌劑貨號：CSP092）、培養(yǎng)箱水盤（中喬新舟培養(yǎng)箱水盤抑菌劑貨號：CSP091）、水浴鍋（中喬新舟水浴鍋抑菌劑貨號：CSP010）、超凈臺和實驗器具進行徹底消毒，必要時使用紫外線照射。
預(yù)防措施：定期更換培養(yǎng)基和血清，保持實驗環(huán)境的低濕度，減少霉菌滋生。
4、支原體污染
支原體污染是細胞培養(yǎng)中最難檢測的污染類型之一，因其不引起明顯渾濁或pH變化。
顯微鏡觀察：顯微鏡下無法觀察到；
細胞影響：細胞生長速度明顯減慢，形態(tài)變得瘦長，出現(xiàn)“拉絲”現(xiàn)象，背景出現(xiàn)“小黑點”
檢測與處理措施：
檢測方法：使用PCR檢測或支原體檢測試劑盒（中喬新舟支原體快速檢測試劑盒（LAMP）貨號：CSP218和支原體檢測試劑盒貨號：ZQ505-K）確認污染。
處理方法：
· 對于普通細胞株，建議直接丟棄。
· 對于珍貴細胞株，可嘗試使用支原體清除試劑（中喬新舟支原體清除劑（升級版）貨號：CSP037）2個月可清除，但需嚴格監(jiān)控處理后的細胞狀態(tài)。
預(yù)防措施：定期檢測細胞株，保持無菌操作，如果擔心支原體污染可以提前預(yù)防（中喬新舟支原體高效預(yù)防試劑（200X）貨號：CSP201），使用高質(zhì)量培養(yǎng)基和血清。
5、黑膠蟲污染：
黑膠蟲污染在細胞培養(yǎng)中較為特殊，早期對細胞影響較小，但數(shù)量增加后會顯著干擾細胞生長。特征包括：
顯微鏡觀察：黑膠蟲在顯微鏡下呈現(xiàn)為黑色顆粒狀或片狀，通常在高倍鏡下觀察時，這些黑色顆粒會進行“布朗運動”。
培養(yǎng)基變化：培養(yǎng)液不會變得渾濁，但隨著培養(yǎng)時間的延長，小黑點的數(shù)量會逐漸增多。更換培養(yǎng)液或清洗細胞無法去除這些小黑點。但細胞狀態(tài)逐漸惡化。
處理措施：
專用清除劑：用黑膠蟲清除試劑盒（中喬新舟黑膠蟲清除試劑（200X）貨號：CSP093和黑膠蟲清除試劑（2000X）CSP214）可以去除。專門針對黑膠蟲的殺滅和抑制，效果顯著且對細胞無明顯毒性。
環(huán)境清潔：對培養(yǎng)箱和實驗器具進行徹底消毒，防止黑膠蟲再次滋生。
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