細(xì)胞凍存液——生命的“時間膠囊”
細(xì)胞凍存是保存細(xì)胞的重要手段，通過低溫來延緩細(xì)胞的生命活動。這種技術(shù)使細(xì)胞能夠得以保存，在需要的時候，又可以被復(fù)蘇用于各種實驗。
19世紀(jì)末，科學(xué)家開始研究低溫對生物組織的影響。早期的實驗表明，單純冷凍會導(dǎo)致細(xì)胞冰晶形成和滲透壓失衡而死亡。1937年，Luyet和Hodapp提出“冰晶損傷”理論，為后續(xù)冷凍保護研究奠定了基礎(chǔ)。1949年，英國科學(xué)家在研究精子冷凍時，偶然發(fā)現(xiàn)甘油能顯著提高冷凍后精子的存活率。甘油是一種滲透性冷凍保護劑（CPA），可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，降低冰點并減少冰晶形成。它通過平衡細(xì)胞內(nèi)外的滲透壓，防止細(xì)胞在冷凍過程中因脫水而破裂。1959年，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)二甲基亞砜（DMSO）同樣具有優(yōu)異的冷凍保護效果，尤其適用于哺乳動物細(xì)胞。DMSO比甘油更易穿透細(xì)胞膜，且毒性較低，迅速成為細(xì)胞凍存的標(biāo)準(zhǔn)保護劑之一。1963年P(guān)eter Mazur提出冷凍損傷的“兩因素假說”：快速冷凍時，細(xì)胞內(nèi)冰晶形成，破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞器；慢速冷凍時，細(xì)胞外冰晶形成導(dǎo)致細(xì)胞脫水，胞內(nèi)溶質(zhì)濃度升高，造成化學(xué)毒性。該理論為程序化慢凍法提供了科學(xué)依據(jù)。
實驗過程中，大多數(shù)細(xì)胞的凍存遵循“慢速凍存”的原則，通過程序降溫盒或程序化冷凍儀，控制降溫速率（通常為1°C/min），使細(xì)胞在冷凍過程中逐步脫水，避免細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰。該方法顯著提高了凍存細(xì)胞的存活率。
研究表明5%-10%的DMSO最適合細(xì)胞凍存，具體比例要根據(jù)細(xì)胞種類調(diào)整，對DMSO敏感的細(xì)胞則需要降低比例。根據(jù)小尚的經(jīng)驗，8% DMSO適用于大部分細(xì)胞系。同時，還需根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)難度調(diào)整血清比例，越難養(yǎng)的細(xì)胞越要多加血清，過于脆弱的細(xì)胞可用血清+DMSO凍存，不加培養(yǎng)基。我們常用的凍存液配方是92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦)。
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尚恩生物提供的特級胎牛血清呈淺黃色澄清、無溶血溶液，經(jīng)各項檢測確認(rèn)無菌、無支原體、無噬菌體及相關(guān)牛源病毒，低內(nèi)毒素（＜3EU/mL），不含外源激素、生長因子、抗生素等。細(xì)胞培養(yǎng)測試效果良好，細(xì)胞生長速度、形態(tài)均正常，可用于培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞、原代細(xì)胞以及大部分干細(xì)胞。
尚恩非程序性細(xì)胞凍存液（無血清）是一種不含血清且不需要經(jīng)過程序降溫步驟的凍存液，可以重懸細(xì)胞后直接置于超低溫冰箱而無需逐步降溫或者程序性凍存盒，極大方便了細(xì)胞凍存操作，同時減少了血清對細(xì)胞 及實驗的影響。
無論用何種凍存液，都建議做凍檢再正式凍存：即凍存24h后復(fù)蘇一支，確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)沒問題，即可進(jìn)行大批量凍存。凍檢成功前要留至少一瓶細(xì)胞培養(yǎng)，以免復(fù)蘇失敗導(dǎo)致細(xì)胞絕種。
公司簡介SUNNCELL
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