脫氧胞苷三磷酸溶液(100 mM)(dCTP)

特別提示：包括脫氧胞苷三磷酸溶液(100 mM)(dCTP)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：脫氧胞苷三磷酸溶液(100 mM)(dCTP)
英文名稱：dCTP Solution(100 mM)
產(chǎn)品貨號(hào)：SY0042
產(chǎn)品規(guī)格：400μL

dCTP即2-deoxycytidine 5-triphosphate，中文名為脫氧胞苷三磷酸，常用于PCR、real-time PCR、RT-PCR、cDNA合成、引物延伸反應(yīng)、DNA測(cè)序、DNA標(biāo)記等各種常規(guī)分子生物學(xué)反應(yīng)。

本產(chǎn)品為溶液鈉鹽形式，用超純水配制，并用高純度NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，濃度為100mM。

經(jīng)檢測(cè)，dCTP純度大于99%（HPLC），且無DNase和RNase污染。本產(chǎn)品為即用型，可以直接用于PCR等各種常規(guī)分子生物學(xué)反應(yīng)。

注意事項(xiàng)
1)可以室溫溶解，溶解后宜存放于冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即置于-20℃保存。
2)為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

儲(chǔ)存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融。

根據(jù)您的關(guān)注的脫氧胞苷三磷酸溶液(100 mM)(dCTP)，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：



名稱：PCR Master Mix (含綠色電泳染料)
貨號(hào)：YT383
規(guī)格：400次|2000次10000次
本品是含有藍(lán)色和橙色染料(電泳位置分別約4kb和50bp)的2倍濃度的PCR預(yù)混液，含有2X Taq DNA Polymerase、2X PCR Buffer、2X dNTP和2X Loading Buffer，只需加入模板DNA、引物和水即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并且擴(kuò)增完畢后可以直接上樣電泳。主要適用于cDNA或基因組DNA等的常規(guī)PCR擴(kuò)增，特別適合于定性或半定量的PCR擴(kuò)增，也可用于長(zhǎng)度小于2kb的DNA片段的擴(kuò)增和克隆。

本品中已經(jīng)含有所有的通用組分，用戶只需自備引物、模板DNA和水即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增。大大簡(jiǎn)化了PCR操作，使操作更加快捷，也減少了PCR操作過程中可能導(dǎo)致的污染，使PCR的重復(fù)性更好�？梢詳U(kuò)增出長(zhǎng)達(dá)8kb的片段，但通常更適合用于擴(kuò)增2kb以下的DNA片段。

本產(chǎn)品中加入了藍(lán)色和橙色的電泳示蹤染料(整體呈現(xiàn)綠色)，其在濃度為1%瓊脂糖膠中的遷移位置分別大約位于4kb和50bp處。PCR結(jié)束后可直接進(jìn)行電泳檢測(cè)，無需再添加上樣緩沖液。藍(lán)色和橙色示蹤染料不會(huì)影響對(duì)相應(yīng)DNA條帶的觀察和檢測(cè)。

本產(chǎn)品穩(wěn)定性高，經(jīng)測(cè)試，反復(fù)凍融15次后對(duì)PCR的擴(kuò)增效果無顯著影響。反復(fù)凍融15次前后，使用不同引物擴(kuò)增100-1500bp間不同長(zhǎng)度目的片段的效果如下圖所示。


本產(chǎn)品反復(fù)凍融15次前后擴(kuò)增不同長(zhǎng)度產(chǎn)物的效果圖。A. 反復(fù)凍融前本產(chǎn)品進(jìn)行PCR的擴(kuò)增結(jié)果。B.反復(fù)凍融15次后的本產(chǎn)品進(jìn)行PCR的擴(kuò)增結(jié)果。除本產(chǎn)品是否反復(fù)凍融15次外，A和B的反應(yīng)體系完全相同，電泳的上樣量也相同。

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期一年。

名稱：BaHF高保真DNA聚合酶
貨號(hào)：WE0113
規(guī)格：500U|2500U
  本產(chǎn)品是經(jīng)過特殊處理的熱啟動(dòng)高保真聚合酶。該聚合酶具有5"-3"DNA聚合酶活性，5"-3"核酸外切酶活性和3"-5"核酸外切酶活性，在普通PCR條件下，與BaldStar Taq DNA Polymerase相比，具有擴(kuò)增效率高、錯(cuò)配率低的優(yōu)良性能�；瘜W(xué)修飾使該酶在常溫下沒有聚合酶活性，有效避免在常溫條件下由引物和模板非特異性結(jié)合或引物二聚體而產(chǎn)生的非特異性擴(kuò)增，酶的激活須在95℃下孵育10分鐘，該條件可以整合入已有的PCR熱循環(huán)程序。優(yōu)化的緩沖體系使酶的作用發(fā)揮最大功效，實(shí)現(xiàn)對(duì)目的片段的高保真、高特異性、高擴(kuò)增效率、高靈敏度擴(kuò)增。使用本制品擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物的3"端附有一個(gè)“A”堿基，因此可直接用于T/A克隆。本產(chǎn)品應(yīng)用于常規(guī)的PCR、RT-PCR和多重PCR，特別適用于對(duì)特異性、保真性和擴(kuò)增效率均有較高要求的PCR。

產(chǎn)品組成：

組份	500U	2500U
BaHF DNA Polymerase, 5 U/μl	100μl	5×100μl
5×BaldStar PCR Buffer	1.9ml	5×1.9ml

注意：本產(chǎn)品的5×BaldStar PCR Buffer中含有8.5 mM鎂離子。

活性定義：
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在74℃，30分鐘內(nèi)，將10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸性不溶物質(zhì)所需的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。

質(zhì)量控制：
1、經(jīng)過多次柱純化，SDS-PAGE檢測(cè)其純度大于99%；
2、經(jīng)檢測(cè)無外源核酸酶活性；
3、PCR方法檢測(cè)無宿主殘余DNA；
4、能有效地?cái)U(kuò)增人基因組中的單拷貝基因；
5、室溫存放一個(gè)月，無明顯活性改變。

使用方法：
以下舉例為以人基因組DNA為模板，擴(kuò)增1 kb的片段的PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化。

1、PCR反應(yīng)體系

試劑	50μl反應(yīng)體系	終濃度
5×BaldStar PCR Buffer	10μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	＜0.5μg	＜0.5μg/50μl
BaHF DNA Polymerase ，5 U/μ l	0.5μl	2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物濃度請(qǐng)以終濃度0.1-1.0μM作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

2、PCR反應(yīng)條件

步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	95℃	10 min
變性	94℃	30 s	30-40個(gè)循環(huán)
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
終延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度Tm低5℃，無法得到理想的擴(kuò)增效率時(shí)，適當(dāng)降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，提高退火溫度，由此優(yōu)化反應(yīng)條件。
2)延伸時(shí)間應(yīng)根據(jù)所擴(kuò)增片段大小設(shè)定，本產(chǎn)品中所包含的BaHF DNA Polymerase的擴(kuò)增效率為1-2 kb/min。
3)可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯(cuò)配機(jī)率會(huì)增加，非特異性背景嚴(yán)重。所以在保證產(chǎn)物得率的前提下應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)。
4)本產(chǎn)品須在預(yù)變性95℃，10 min條件下實(shí)現(xiàn)酶的活化。

儲(chǔ)存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融。

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貨號(hào)	名稱	規(guī)格
BTN120679	6nt隨機(jī)引物(抗水解)(0.5mM)	100μL
YT382	PCR Master Mix (含藍(lán)色電泳染料)	400次|2000次|10000次
YT401	核酸酶/DNA清除劑(噴霧清除劑)	250ml
WE0113	BaHF高保真DNA聚合酶	500U|2500U
WE0159	dNTP混合溶液(10 mM)	1ml|5ml
JN0002	第一鏈cDNA合成試劑盒	50次|100次