蛋白生物學(xué)技術(shù)服務(wù)-原核表達(dá)

技術(shù)原理與實(shí)驗(yàn)步驟

將目的基因片段連接至合適的原核表達(dá)載體后，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21（DE3）菌株內(nèi)，隨后利用菌自身的蛋白表達(dá)系統(tǒng)通過溫度和誘導(dǎo)劑的控制，誘導(dǎo)其在宿主菌內(nèi)表達(dá)目的蛋白質(zhì)，將表達(dá)樣品進(jìn)行SDS-PAGE 以檢測表達(dá)蛋白質(zhì)。原核表達(dá)系統(tǒng)是至今為止最為成熟可靠的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，其優(yōu)點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)周期短、成本低、產(chǎn)量高。

優(yōu)勢

隊伍專業(yè)，熟練掌握密碼子優(yōu)化、載體構(gòu)建、等電點(diǎn)分析、表達(dá)純化、包涵體變性復(fù)性等操作，在蛋白表達(dá)純化及發(fā)酵生產(chǎn)實(shí)戰(zhàn)經(jīng)驗(yàn)豐富；儀器完備，擁有蛋白純化所需的離子柱、分子篩、親和柱、疏水柱、AKTA purifier系統(tǒng)。

密碼子優(yōu)化

根據(jù)原核細(xì)胞蛋白表達(dá)密碼子偏好進(jìn)行密碼子優(yōu)化，完善蛋白表達(dá)，解決蛋白無法表達(dá)及包涵體蛋白等問題。

原核表達(dá)

構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化到BL21感受態(tài)細(xì)胞，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。

包涵體變性復(fù)性

蛋白在原核細(xì)胞中表達(dá)后，有時無法分泌到細(xì)胞質(zhì)中，而是以包涵體的形式存在，無法從上清中獲取，需收集包涵體，對包涵體進(jìn)行變性復(fù)性，獲取目的蛋白。

純化

蛋白表達(dá)純化專業(yè)人員，對研究蛋白進(jìn)行等電點(diǎn)分析、疏水性分析等，豐富的經(jīng)驗(yàn)，熟練的隊伍，快速優(yōu)質(zhì)的純化蛋白。

內(nèi)毒素檢測及去除

內(nèi)毒素是菌體破裂后產(chǎn)生的毒素，主要成分是類脂質(zhì)A，會引發(fā)人體發(fā)熱、休克、白細(xì)胞反應(yīng)等免疫反應(yīng)，對于藥用蛋白產(chǎn)品，需將內(nèi)毒素清除，否則會引發(fā)安全問題。

服務(wù)流程

• 依據(jù)客戶提供的蛋白基因、載體要求，設(shè)計克隆方案，構(gòu)建原核表達(dá)載體�？商峁�6xHis、GST、MBP等攜帶標(biāo)簽及腸激酶、凝血酶等蛋白酶切除標(biāo)簽蛋白的表達(dá)載體，提供多種選擇；
• 將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21（DE3）菌株內(nèi)，優(yōu)化溫度、IPTG濃度等條件誘導(dǎo)蛋白表達(dá)，SDS-PAGE驗(yàn)證；
• 對蛋白性質(zhì)進(jìn)行分析，選擇合適的方法分離純化蛋白；
• 依據(jù)客戶要求如蛋白純度、是否需要帶標(biāo)簽、帶何種類型的標(biāo)簽、蛋白溶解緩沖液要求，是否凍干等提供最終蛋白產(chǎn)品，附加載體構(gòu)建報告、SDS-PAGE檢測報告、目的基因質(zhì)粒、重組細(xì)菌菌株、重組表達(dá)菌株等信息。