定量PCR Realtime PCR，RT-PCR qPCR

      GENELIFE 技術(shù)服務(wù)中心目前使用的儀器為美國(guó)Applied Biosystems公司最新推出的ABI7900HT型高通量實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)。由于其在定量PCR系統(tǒng)領(lǐng)域的領(lǐng)先地位，優(yōu)越的配置，精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，加上快速高通量的強(qiáng)大功能，使得該系統(tǒng)已經(jīng)成為各大醫(yī)院，科研機(jī)構(gòu)的首選。 

     可以提供的Realtime－PCR實(shí)驗(yàn)服務(wù)包括 TaqMan熒光探針法和SYBR Green熒光染料法。 
  
SYBR green  
       在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。  
  
適用：靈敏度高：使用SYBR可使熒光效果增強(qiáng)到1000倍以上  
通用性好,不需要設(shè)計(jì)探針,方法簡(jiǎn)便,省時(shí),價(jià)格低廉。  
通用型方法，在國(guó)內(nèi)外科研中普遍使用。  
高通量大規(guī)模的定量PCR檢測(cè)  
專一性要求不高的定量PCR檢測(cè)。  
  
  
Taqman Probe  
       PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步 

  
適用：具有高適應(yīng)性和可靠性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定重復(fù)性好，特異性更高。  
適用于擴(kuò)增序列專一的體系的檢測(cè)。  
樣品中靶基因含量過低的定量PCR檢測(cè)。  
靶基因的特異序列較短，無論怎樣優(yōu)化引物設(shè)計(jì)條件都不能解決。  
存在與靶基因同源的序列，在PCR中容易出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，對(duì)特異性要求較高的定量。  
廣泛用于人類傳染病的診斷和病原定量,在動(dòng)物病原體基因的檢測(cè),畜禽產(chǎn)品的檢驗(yàn)檢疫,生物制品的鑒定。