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一個載體編碼4條shRNA質(zhì)粒
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服務(wù)商: 尚柏生物醫(yī)學技術(shù)(北京)有限公司 | 查看該公司所有服務(wù) >> |
一個載體編碼4條shRNA質(zhì)粒 |
技術(shù)簡介:
將4個不同哺乳動物啟動子(hU6、hH1、mU6和h7SK)分別操縱的shRNA轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)單元(啟動子-shRNA正義鏈-loop環(huán)-shRNA反義鏈-終止信號)構(gòu)建到一個RNAi載體中,實現(xiàn)了一個載體編碼4條shRNA。不同啟動子轉(zhuǎn)錄各自相應(yīng)的shRNA結(jié)構(gòu)單元,有效避免意外重組,而且每條shRNA能夠有效轉(zhuǎn)錄。
產(chǎn)品特點:
1. 免除shRNA有效序列篩選
隨著RNAi實驗經(jīng)驗積累,專業(yè)RNAi公司通常能做到設(shè)計的每3個shRNA中,有一個針對目標基因的抑制效率達到70%或更高。在此基礎(chǔ)上,一個載體編碼4個shRNA專利產(chǎn)品基本可以做到每個產(chǎn)品都是有效的,免除了siRNA有效序列篩選實驗。本公司使用該技術(shù)對50個基因設(shè)計的shRNA,49個基因干擾效率達到90%以上。
2. 可同時干擾多個不同的基因
例1:凋亡基因Bcl-2家族促凋亡基因包括Bak、Bad、Bid、Bax和Bcl-xs五個基因。關(guān)閉Bcl-2家族某一基因?qū)τ谝恍┘毎蛲稣{(diào)控不理想。如果同時關(guān)閉Bcl-2家族5個基因中的4個,則凋亡率會低得多。制備4個針對Bcl-2家族不同基因的shRNA結(jié)構(gòu)單元,mU6-shRNA1針對 Bak; h U6-shRNA2針對Bad ; h H1-shRNA3 針對 Bid;h 7SK-shRNA4針對 Bax。構(gòu)建到同一質(zhì)粒載體上,導入細胞,提高細胞抵抗 凋亡因子。
例2:Ha-ras和c-myc二個癌基因可以協(xié)同作用促進腫瘤的轉(zhuǎn)化、惡化和轉(zhuǎn)移.AEG-1是Ha-ras和c-myc下游共同的靶分子。AEG-1被癌基因誘導后活化磷酸肌醇-3激酶的活化,Ha-ras又受到c-myc的調(diào)節(jié)。上述途徑共同導致了腫瘤的惡化。使用RNAi技術(shù)單獨關(guān)閉Ha-ras或c-myc均難以達到關(guān)閉癌基因的目的。利用一個載體編碼多個shRNA技術(shù),一個shRNA針對Ha-ras,一個針對c-myc,一個shRNA針對AEG-1、一個shRNA針對磷酸肌醇-3激酶。有可能實現(xiàn)對Ha-ras和c-myc的關(guān)閉,效果更好(本實驗未實施,僅共參考)。 服務(wù)內(nèi)容:
1. 一個載體編碼四條針對同一基因的shRNA以減少篩選工作量或提高抑制效率。
2. 一個載體編碼四條針對不同基因的shRNA。
實驗步驟及周期:
制備一個載體四條shRNA的質(zhì)粒所需時間為15個工作日
客戶須知:
1. 所得質(zhì)粒溶解在DEPC水中,應(yīng)放在-20℃冰箱保存
2. 已轉(zhuǎn)化質(zhì)粒菌液應(yīng)加50%甘油,-70℃冰箱保存
服務(wù)承諾:
1. 保證每條ShRNA編碼序列都正確無誤
2. 我們會提供測序結(jié)果電子版和彩圖版 |