金屬蛋白酶組織抑制因子（TIMP-1）ELISA試劑盒
金屬蛋白酶組織抑制因子（TIMP-1）ELISA試劑盒
德國IBL原裝進口，貨號：RE54081
德國IBL中國獨家代理商“深圳科潤達生物工程有限公司”竭誠為您服務
預期用途
此試劑盒用于人血漿中TIMP-1的體外定量檢測
簡介
細胞外基質的蛋白水解在許多生理和病理過程中發(fā)揮著重要的作用，其中一關鍵因素是基質金屬蛋白酶（MMP）和其內源抑制劑
多數研究顯示，MMP參與了部分腫瘤的發(fā)展，如結腸癌，胃癌，肺癌，乳腺癌
組織中的蛋白水解活性受內源性蛋白酶抑制劑調節(jié)，最重要的MMP內源抑制劑就是TIMPs
TIMP-1是一N末端糖基化蛋白。由184個氨基酸組成，分子量為28kDa
TIMP-1在不同的生理過程中對細胞外基質穩(wěn)態(tài)的維持發(fā)揮了關鍵作用，細胞外基質的敏感平衡一旦破壞，將會導致許多病理生理反應，如炎癥，慢性退行性疾病和腫瘤的侵襲、轉移和血管再生
除了這些MMP抑制活性外，還有一些不是依靠TIMPs而發(fā)揮作用的，如抗凋亡過程，刺激細胞增殖和血管再生導致的腫瘤增殖和惡性轉化，這時的TIMPs則作為各癌癥的陰性預后標記物。TIMP-1成為了目前癌癥研究診斷的焦點
實驗原理
此實驗基于夾心原理。包被板包被了抗TIMP-1多克隆抗體，樣品中的TIMP-1特異性結合包被抗體，由HRP標記的鼠二抗分析檢測，底物反應催化酶聯(lián)檢測系統(tǒng)，顏色強度與樣品中的TIMP-1的量成正比，樣品結果可直接從標準曲線上讀取
注意事項
1. 試劑僅供體外診斷和專業(yè)人士使用。
2. 開始試驗前，請仔細閱讀說明書，確定所有的事項都已明白。
3. 如果試劑盒有破壞的請與IBL公司聯(lián)系或是提交您的投訴單，但自您拿到試劑盒后最遲不超過一個星期。嚴重破損的成分不能用于實驗，將其保存好直至找到最終的解決辦法。之后，按照官方條例將其處理掉。
4. 確認批號和有效期，不要將不同批號的試劑混合，不要使用過期試劑。
5. 遵守實驗室規(guī)章制度，按規(guī)定著裝，當必要時帶上保護性眼鏡。
6. 試劑盒內的試劑包含危險品可能會刺激眼睛跟皮膚，詳細見提供的材料和標簽。產品的材料安全數據能夠從IBL公司主頁上下載，也可直接咨詢IBL公司獲取。
7. 按照相應的國家生物安全管理條理公認的方法處理樣品和試劑。
8. 避免接觸終止液，它可能會刺激和灼傷皮膚。
9. 試劑盒中的所有試劑包括檢測過的人血清/血漿對HIV/II，HbsAg和HCV都表現為陰性，但是試劑中會出現此類病毒（HIV/II，HbsAg和HCV）或其他具有感染性的病原體的可能性都不能完全被排除。因此，所有的試劑在使用和處理的過程中都應當作潛在生物有害物質進行處理。
貯存和穩(wěn)定性
試劑盒應當在2~8℃運輸和儲存，避免高溫和陽光直射。準備好的試劑的儲存及其穩(wěn)定性在相應章節(jié)已闡明。包被條在封閉的袋子內2~8℃能保存到有效期。
樣品采集和貯存
注意：不要使用血清，因為在血清制備過程中，a-粒細胞會不受控制的釋放出TIMP-1。TIMP-1只能用血漿檢測
血漿（EDTA）
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注意靜脈穿刺采集全血的常規(guī)注意事項。從采集到血液樣品的那一刻起到檢測時都應保持血液樣品的化學整體性。不要使用明顯溶血、黃疸的和脂血樣品。如果樣品出現混濁，則在實驗前應當離心以除去所有的微粒物質。 | |||
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儲存 |
2-8℃ |
≤-20℃ |
避免熱源和太陽直射，避免反復凍溶。 |
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穩(wěn)定性 |
48小時 |
6個月 | |
試劑盒組成
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劑量/數量 |
標志 |
成分/部件 |
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1×12×8 |
MTP |
微量滴定板（包被板）
可拆，包被了抗-TIMP-1抗體（羊） |
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1×0.1mL |
ENZCONJ
CONC |
酶聯(lián)物（101×）濃縮
HRP標記的抗TIMP-1抗體，穩(wěn)定劑 |
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6×0.5mL |
CAL A-F |
標準品A-F
濃度為：0,10.2,51,102,204,510ng/ml
即用，包含：TIMP-1，穩(wěn)定劑 |
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2×0.5mL |
Control 1+2
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質控品 1+2
即用，包含：TIMP-1，穩(wěn)定劑
濃度/可接受范圍見質控單 |
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1×12mL |
ASSAYBUF
CONC |
試驗緩沖液，20X
包含：磷酸緩沖液，BSA和Proclin300 |
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1×100mL |
WASHBUF
CONC |
洗滌液，（10×）濃縮
包含：磷酸緩沖液，吐溫 |
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1×12mL |
TMB SUBS |
TMB底物液
即用，包含：TMB，緩沖液，穩(wěn)定劑 |
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1×12mL |
TMB STOP |
TMB終止液
即用，包含：0.5M 硫酸 |
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3× |
FOIL |
粘合金屬板（封板片） |
實驗所需材料但試劑盒未提供
1. 移液器 體積：5,20,50,100,1000ul
2. 一次性玻璃試管
3. 混合器
4. 8通道移液器
5. 洗瓶，全自動或半自動洗板機
6. 酶標儀
7. 去離子水或雙蒸水
8. 吸水紙，槍頭和計時器
操作注意事項
1．樣品處理不當或者修改實驗步驟都會影響到結果，必須嚴格按照說明書的步驟進行實驗。
2．一旦實驗開始，所有步驟必須完整的進行下去，必須確定實驗所需的試劑及物品都在適當時間內準備好，實驗開始前讓試劑和樣本都平衡至室溫，（18~25℃），試劑和樣本在使用之前混勻應避免起泡沫。
3．避免污染試劑，槍頭和微孔/管。每個微孔的加樣都應該用新的槍頭，避免將不同試劑的蓋子蓋錯，用完試劑后要蓋好蓋，不要重復使用用過的微孔/管、試劑。
4. 有些組分溶液＜250ul，打開瓶蓋之前確保溶液全部在瓶底
5．建議對樣本進行兩次測試，鑒定潛在的吸量錯誤
6．設計一個合適的包被板布局
7．孵育時間影響結果，所有的孔必須在同樣順序和時間間隔下加樣，這里推薦使用8道移液器加樣。
8．洗板是非常重要的，不恰當的洗板會導致錯誤的結果。這里推薦使用洗板機。孵育時不要讓孔干燥。小心地棄去試劑，當洗板時應當讓孔內裝滿洗滌緩沖液，并且沒有其他殘留物留在孔內。
9．濕度會影響包被孔/管。在平衡至室溫之前不要開袋。沒有使用的板孔應立即用含有干燥劑的可重封小袋重新封緊。
試劑準備
凍干或濃縮成分的準備
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稀釋
溶解 |
成分 |
|
稀釋液 |
比例 |
備注 |
貯存 |
穩(wěn)定性 |
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10ml |
洗滌濃縮液 |
90ml |
去離子水 |
1:10 |
充分混勻 |
2-8℃ |
4周 |
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1ml |
試驗緩沖濃縮液 |
19ml |
去離子水 |
1:20 |
充分混勻 |
2-8℃ |
1周 |
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20ul |
酶聯(lián)物 濃縮 |
2ml |
稀釋的試驗緩沖液 |
1:101 |
混勻，避免產生氣泡 |
現配現用 | |
樣品稀釋
|
病人樣品 |
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比例 |
備注 |
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血漿（EDTA） |
常規(guī)稀釋 |
稀釋的試驗緩沖液 |
1:51 |
e.g. 10 µL + 500 µL |
實驗步驟
1. 吸取50ul的標準品，質控品和病人樣品于相應的孔內
2. 每孔加入50ul的稀釋的酶聯(lián)物，蓋板，小心振蕩微孔板
3. 室溫下（18-25℃）孵育90min
4. 移去蓋板，棄去廢液，每孔加入250ul的洗滌液洗板5次，吸水紙上拍干
5. 每孔加入100ul的TMB底物液
6. 室溫下孵育30min
7. 每孔加入100ul的終止液，小心混勻，液體顏色由藍色變?yōu)辄S色
8. 加入終止液后15min 內酶標儀上讀數
計算結果
在半對數坐標紙上或自動計算的方法，以標準品的OD值（Y軸，線性）對其濃度（X軸，對數）做一條標準曲線。使用三次回歸、四參數或雙對數曲線方程可以得到更好的標準曲線。在推算標準曲線時，應當充分利用好每一個標準品數值（明顯逸出的數值應當被忽略，再使用更合理的數值代替它）。樣品的濃度可以從標準曲線上直接讀取
將稀釋了的樣品結果乘以稀釋因子即可得到其相應的結果
附：采用全自動酶標儀檢測，只需檢測前設置好酶標儀的相關參數，如坐標參數（線性，半對數）和計算方式參數（三次回歸、四參數或雙對數曲線方程），即可直接得到結果
正常值
此檢驗結果不能作為治療結果的唯一原因，還應結合臨床觀察和診斷試驗
健康人群EDTA血漿中的TIMP-1的值低于100ng/ml（95%：100ng/ml；90%：80ng/ml）
我們建議每個實驗室都應建立自己的正常值范圍
檢驗方法的局限性
樣品的采集對試驗結果有著重要的影響，請仔細閱讀“樣品采集和貯存”的部分
以下物質低于下面所述濃度，其實驗結果都會不明顯
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血紅蛋白 |
8mg/ml |
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膽紅素 |
5mg/ml |
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甘油三酯 |
91mg/ml |
本譯文僅供參考，詳情請以原文為準
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