細胞培養(yǎng)知識小課堂—培養(yǎng)基篇

一、L- 谷氨酰胺（L-Glutamine）是什么？我的細胞培養(yǎng)需要加 L- 谷氨酰胺嗎？為什么培養(yǎng)條件信息中沒有列出？我應該加多少 L-谷氨酰胺？

• L- 所有 ATCC 配方的經典細胞培養(yǎng)基都含有 L-谷氨酰胺。因此，如果一個細胞系按照 ATCC 培養(yǎng)條件來培養(yǎng)，它是已經含有 L-谷氨酰胺了。如果您購買的培養(yǎng)基中不含 L-谷氨酰胺，則必須在使用前將其無菌添加到培養(yǎng)基中。在添加更多 L-谷氨酰胺之前，一定要檢查基礎培養(yǎng)基的配方。哺乳動物細胞的 L-谷氨酰胺濃度在 0.68 mM（199 培養(yǎng)基）到 4 mM（Dulbecco 改良 Eagle 培養(yǎng)基）之間變化。

二、什么是非必需氨基酸 (NEAA)？為什么要添加到細胞培養(yǎng)基中？

• NEAA(

三、為什么有的客戶要求培養(yǎng)基中不含酚紅？

• 酚紅在培養(yǎng)基中用作 pH 指示劑。在較低的 pH 值下，它會使培養(yǎng)基變黃，而在較高的 pH 值下，它會使培養(yǎng)基變紫。對于大多數(shù)培養(yǎng)基（pH7.4），呈鮮紅色。不幸的是，酚紅可以模仿一些類固醇激素的作用，特別是雌激素。一般研究雌激素敏感細胞，如乳腺組織，使用不含酚紅的培養(yǎng)基。此外，當酚紅包含在一些無血清制劑中時，鈉鉀離子的穩(wěn)定狀態(tài)被破壞；這種影響通過在培養(yǎng)基中加入血清或牛垂體激素而被中和或減輕。做流式細胞檢測時經常不使用加有酚紅的培養(yǎng)基，因為它的顏色會干擾檢測。

四、為什么我們會在細胞培養(yǎng)基中添加丙酮酸鈉？

• 丙酮酸鈉是糖酵解過程中的一種中間有機酸代謝產物，是 Embden-Myerhoff 通路的第一個成分，可以快速很容易地進出細胞。因此，將其添加到組織培養(yǎng)基中為合成代謝過程提供能量來源和碳的骨架。它的加入有助于維持某些特定的細胞，有助于克隆，并且在培養(yǎng)基中血清濃度降低時是必要的。丙酮酸鈉也有助于降低熒光光誘導的光毒性。通常添加丙酮酸鈉以 1 mM 為最終濃度。丙酮酸鈉 100 mM（100X）無菌溶液在 WHELAB 盈灣生物官網上買到。

五．細胞培養(yǎng)基中的 HEPES 緩沖液，我可以在細胞培養(yǎng)基中使用 HEPES 緩沖液嗎？

• HEPES

六．β-巰基乙醇在細胞培養(yǎng)中起什么作用？

• β-巰基乙醇被添加到淋巴細胞或其他細胞培養(yǎng)物中，因為用于培養(yǎng)基的 FBS 中的氨基酸半胱氨酸短缺，而存在大量的胱氨酸。一些像 T 細胞這樣的細胞不能將胱氨酸運輸?shù)郊毎�質中，在那里它必須轉化為半胱氨酸。β-巰基乙醇將胱氨酸還原為可被細胞轉運的形式，然后轉化為細胞生長所需的半胱氨酸。β-巰基乙醇也是一種還原劑，可以分解培養(yǎng)細胞產生的許多有毒代謝物，改善細胞周圍的環(huán)境。

七．霍亂毒素（cholera toxin）是什么？為什么用在細胞培養(yǎng)基中？

• 霍亂毒素（cholera toxin）是一種腺苷酸環(huán)化酶激活劑。它在體外刺激正常乳腺上皮細胞的生長。在生物化學上，它與鈣的運輸有關。這種補充劑也被發(fā)現(xiàn)對來自結腸、肺、前列腺和皮膚的細胞有生長刺激作用。WHELAB 提供 100ng/ml cholera toxin.

八．開封后的培養(yǎng)基在冰箱放置會變紫色？

• 培養(yǎng)基保存在 4℃ 冰箱時，培養(yǎng)基內的

九．液體培養(yǎng)基的保存方法？

• 冷藏！不可冷凍。解凍后 PH 發(fā)生改變、營養(yǎng)成分也會發(fā)生改變�；�礎培養(yǎng)基冷藏保質時間是 1 年。即用型完全培養(yǎng)基保質期是 3 個月。如果偶爾凍結，應當讓其自然溶解并觀察有無沉淀產生，如有果沉淀產生，則不可再用。

十．何時須更換培養(yǎng)基？

• 遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間，一般每周 2～3 次；視細胞生長密度而定，如果細胞密度大，且培養(yǎng)基顏色發(fā)黃，應立即更換培養(yǎng)基。