小鼠懸尾實驗測試方法與指標(biāo)評價

1985年,Steru等建立懸尾實驗方法,其原理主要是:將小鼠尾巴懸掛,小鼠頭部向下成倒懸體位,剛開始小鼠會劇烈掙扎試圖逃脫這一不適的狀態(tài),但掙扎一段時間后發(fā)現(xiàn)逃跑無望會表現(xiàn)出不動狀態(tài),也被認為是一種“絕望”狀態(tài)。懸尾實驗以懸尾小鼠的不動時間為指標(biāo)檢測動物的絕望行為,是抗抑郁藥物初篩以及檢測模型動物是否出現(xiàn)“抑郁樣”行為的常用檢測實驗。
 

• 實驗軟件

VisuTrack動物行為分析軟件采用動物輪廓識別技術(shù)，針對抑郁實驗的特點單獨開發(fā)的識別算法，可精確辨別動物的四肢。先識別動物的全部身體形態(tài)，然后計算動物特征身體部位，針對于每一個身體部位的動作獨立分析。分析更細致，結(jié)果更準(zhǔn)確，數(shù)據(jù)更客觀。

• 測試方法

在小鼠懸尾實驗中，將小鼠尾巴 3 /4 處固定在某 一掛鉤上，離地面 30 厘米左右，并在與小鼠懸掛裝置 水平方向放置攝像頭。實驗過程中，需要有“實驗組” 與“控制組”，分別是用藥與未用藥小鼠，注射藥物一 段時間后進行實驗(皮下注射需等待 30 分鐘，口服藥 物則需要等待 60 分鐘)。

懸尾實驗多采用小鼠,其操作方法如下 :

(1) 實驗開始前,動物尾部懸吊使小鼠呈倒懸體位,頭部應(yīng)與懸尾箱底面保持一定距離。

(2) 如同時進行多只動物實驗時,每兩只動物間應(yīng)用不透明擋板隔開。

(3) 記錄檢測期動物的不動時間。

(4) 實驗時間應(yīng)為 6 min,記錄后 4 min 內(nèi)動物的不動時間。

• 評價指標(biāo)

用不動、運動掙扎二類動作行為的時間進行判定。

(1)搖擺不動：動物停止掙扎,身體保持垂直倒懸狀態(tài),靜止不動。動物的在懸尾實驗中的不動時間越 長表明抑郁程度越重�？瞻讓φ战M c57 小鼠不動時 間較長,均值多大于100s;空白對照組 ICR 小鼠不 動時間均值多小于 100 s;抑郁行為判斷標(biāo)準(zhǔn):不動時間與對照組相比有顯著性增加(P < 0. 05)。

(2)運動掙扎：動物有明顯可見的掙扎運動。運動掙扎時間越短,表明抑郁程度越重。

• 注意事項

1、TST 懸尾實驗不建議用較重的大鼠，因為大鼠只能通過它們的尾巴來支持它們的體重，這對大鼠來說是痛苦的。同樣的道理，應(yīng)該注意避免使用異常重的小鼠（例如用于模擬肥胖的小鼠），在這種情況下，實驗者應(yīng)該尋找替代性的測試，例如強迫游泳實驗。

2、動物從居住環(huán)境帶入實驗環(huán)境應(yīng)適應(yīng)一段時間，通常至少一個小時。

3、實驗環(huán)境應(yīng)保持安靜，突然大的噪音會使小鼠驚慌失措。

4、使用軟件分析時，選擇對比度的背景：白鼠使用黑色背景，黑鼠使用白色背景；也可選擇使用由上海欣軟信息科技有限公司生產(chǎn)的帶背光板的專業(yè)懸尾實驗設(shè)備；對老鼠的顏色沒有要求，更可拍攝出高質(zhì)量，高對比度的實驗錄像。

​5、每只小鼠的實驗的參考空間在 55 高*15 寬*11.5 cm 左右，多通量實驗時，為防止動物彼此觀察或互相影響，中間用隔板隔開；動物懸掛在隔間中間，寬度和深度足夠大，不能與墻壁接觸。

6、懸掛后動物鼻尖與設(shè)備地板之前的參考距離在 20~25 cm 左右。

7、底部建議放置一個可拆卸的拖盤，收集糞便或尿液。

8、懸掛用的膠帶應(yīng)牢固地粘貼在小鼠尾部和懸掛桿上，并且足夠堅固以承受正在測試的小鼠的重量。但是，膠帶不應(yīng)該過于粘滯，因為在實驗結(jié)束會從尾部移除。膠帶尺寸應(yīng)統(tǒng)一，長度 17 厘米，從一端 2 厘米做標(biāo)記。這個 2 厘米的部分用于將膠帶連接到尾部，而剩余的 15 厘米用于懸掛小鼠；膠帶應(yīng)貼在尾部的尾端，尾部留 2-3 毫米的距離。

9、尾巴攀爬阻止器，小鼠在實驗過程，會出現(xiàn)追求和攀爬它們自己的尾巴的現(xiàn)象，這是個普遍的問題。解決方法很簡單，而且非常有效：將一段塑料管切成 4 cm 長中空圓柱體（內(nèi)徑 1.3 cm 左右，1.5 g）放置在小鼠尾巴周圍就能防止這種尾巴爬行行為。注意的是，在沒有使用阻止器之前，已經(jīng)成功爬上尾巴的小鼠知道逃生是可能的。因此應(yīng)將這類小鼠排除。

10、分析時僅有前肢但沒有后肢介入的小動作可判斷為不動；因慣性產(chǎn)生的擺動可判斷為不動；

11、實驗結(jié)束后（通常是 6 分鐘），將動物放回鼠籠，應(yīng)輕輕將膠帶從尾巴上拉下來，不要從尾巴上撕扯膠帶，避免給動物帶來痛苦；

12、清潔用品，每次實驗完成，收集糞便和尿液，徹底擦拭懸掛盒。

如需了解更多詳細的動物行為實驗方法、評價指標(biāo)信息，可以關(guān)注公眾號：bioviewer，動物神經(jīng)科學(xué)與行為學(xué) ！