組蛋白/DNA 結(jié)合蛋白提取試劑盒

重要產(chǎn)品信息

蛋白酶抑制劑可根據(jù)實(shí)驗(yàn)選擇是否加入，如果下游實(shí)驗(yàn)需要較長(zhǎng)時(shí)間或者蛋白提取后保存較長(zhǎng)時(shí)間，建議在裂解液中添加蛋白酶抑制劑。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制劑應(yīng)在使用前加入緩沖液 A 中。（各類抑制劑的添加方法請(qǐng)按照抑制劑母液比例，例如母液是 100x，添加時(shí)按照 1：100添加，即 1ml 緩沖液中添加 10ul 抑制劑）。推薦使用 BCA 試劑盒用于蛋白濃度測(cè)定。

注意：如果 BufferB 在低溫環(huán)境儲(chǔ)存出現(xiàn)沉淀，可以 37 度孵育至沉淀完全溶解。

操作方法：

1.將 Buffer A 和離心管柱和接收管套管放置于冰上預(yù)冷。低速離心（

500-600Xg ，5 分鐘）收集

0.5-5x106 個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞或從組織中分離出的細(xì)胞。推薦使用 Minute TM單細(xì)胞分離試劑盒（目錄號(hào)

SC-012，Invent biotechnologies，MN）從動(dòng)物組織中獲取單細(xì)胞。

2.加入 1ml 預(yù)冷的 PBS 重懸細(xì)胞，將細(xì)胞混懸液轉(zhuǎn)入一個(gè) 2.0ml 離心管中。700Xg，離心 2 分

鐘，沉淀細(xì)胞，將上清液完全棄去。

3.加入 0.5ml Buffer A 重懸細(xì)胞，冰上孵育 5 分鐘。渦旋震蕩幾下后，14,000Xg，離心 2 分鐘。

棄去上清液（此上清液為細(xì)胞胞漿蛋白）。（可選優(yōu)化：用 1.0ml 預(yù)冷的 PBS 清洗沉淀）。

4.加入適量的 Buffer B （如下表 1，根據(jù)細(xì)胞體積或細(xì)胞起始數(shù)量添加）到管中，渦旋震蕩 10秒鐘混勻，迅速轉(zhuǎn)入離心管柱套管中，蓋上蓋子，16,000Xg 離心 30 秒。棄掉離心管柱，收集管中的溶液即為組蛋白和 DNA 結(jié)合蛋白（通常濃度 1-2.5mg/ml）。如果提取的蛋白下游用于免疫沉淀實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)用 PBS-吐溫或其他適配緩沖液 1:3 稀釋蛋白溶液