FITC-Dextran (MW 40000) 熒光探針

FITC-Dextran(MW 40000)是一種異硫氰酸熒光素(FITC)葡聚糖熒光探針(Ex=495 nm;Em=525 nm)。FITC-Dextran(MW 400000)可作為一種標(biāo)記物來(lái)揭示熱休克引起的細(xì)胞損傷，并研究細(xì)胞凋亡的早期和晚期階段。FITC-Dextran(MW 400000)還可用于細(xì)胞滲透性的研究，如血腦屏障通透性以及血腦屏障破壞程度的測(cè)定。

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FITC-Dextran(MW 40000)熒光探針的生物活性

指南（以下是我們推薦的程序。此程序只提供一種指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進(jìn)行修改）。

細(xì)胞標(biāo)記:

適用于正在發(fā)生凋亡的HeLa細(xì)胞和人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)(活的HeLa和PBMC不被FITC-Dextran染色)。

1.43.5°C孵育1 h，37°C孵育8 h，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

2.將細(xì)胞懸浮在100μL的培養(yǎng)基中，在Q-prep管與10μL的propidium iodide(PI)，10μL的FITC-Dextran(MW 40000)混合，PI和FITC-Dextran(MW 40000)的最終濃度分別為7.5μM和1.13μM。

3.將細(xì)胞在室溫黑暗條件下培養(yǎng)25分鐘。

4.取3 mL培養(yǎng)基的標(biāo)記細(xì)胞，500 g離心10分鐘。

5.取離心細(xì)胞，加入1 mL培養(yǎng)基，用流式細(xì)胞術(shù)或熒光顯微鏡分析(PI:Ex=500 nm,Em=600 nm;FITC-Dextran(MW 40000):Ex=495 nm,Em=525 nm)。

細(xì)胞旁滲透性檢測(cè)

1.在transwell室的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入FITC-Dextran(0.1 mg/mL)。

2.在15分鐘后從transwell插入器中收集培養(yǎng)基。

3.測(cè)量熒光信號(hào)(Ex=485 nm,Em=538 nm)。

4.根據(jù)熒光強(qiáng)度計(jì)算FITC-Dextran濃度。

5.計(jì)算滲透率。

體內(nèi)研究

Guidelines(Following is our recommended protocol.This protocol only provides a guideline,and should be modified according to your specific needs).

腸屏障功能測(cè)定

1.小鼠饑餓處理4小時(shí)。

2.FITC-Dextran MW 40000灌胃小鼠(0.6 mg/g)。

3.在4 h內(nèi)測(cè)量熒光強(qiáng)度(Ex nm/Em 520 nm)。

MCE并未獨(dú)立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。