抗體定性定量鑒定和抗體測(cè)序技術(shù)在紅斑狼瘡檢測(cè)中的應(yīng)用

紅斑狼瘡，一種被稱為“不死的癌癥”的免疫性疾病，最近因?yàn)橹�名演員周海媚的不幸去世而再次引起了公眾的廣泛關(guān)注。紅斑狼瘡到底是一種什么�。繉�(duì)人體有哪些危害？為什么人們紛紛聞之喪膽？今天我們一起來(lái)聊聊這個(gè)話題。

紅斑狼瘡是一種慢性自身免疫疾病，其特點(diǎn)是免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的多種抗體錯(cuò)誤地攻擊自身的組織和器官，包括皮膚、關(guān)節(jié)、腎臟、心臟、肺部和神經(jīng)系統(tǒng)等。機(jī)體的免疫系統(tǒng)是幫我們抵擋和消滅病原物質(zhì)的，而現(xiàn)在卻攻擊自身的組織和器官，這無(wú)疑是自己朝自己開(kāi)槍，后果可想而知。紅斑狼瘡的確切原因目前仍不完全清楚，但認(rèn)為遺傳因素、環(huán)境因素和激素等都可能與其發(fā)病有關(guān)。隨著病情的發(fā)展導(dǎo)致多種癥狀，例如疲勞、關(guān)節(jié)疼痛、皮疹等，嚴(yán)重時(shí)甚至危及生命。目前還沒(méi)有根治紅斑狼瘡的方法，患者需要長(zhǎng)期面對(duì)與病魔的斗爭(zhēng)。

圖1. 系統(tǒng)性紅斑狼瘡

由于紅斑狼瘡的癥狀與許多其他疾病相似，確診往往困難重重。臨床上除了結(jié)合病人的臨床癥狀外，對(duì)相關(guān)抗體的檢測(cè)也至關(guān)重要。絕大多數(shù)紅斑狼瘡患者血液中都有抗核抗體（ANA），雖然ANA測(cè)試不是特異性的，但它通常是篩查紅斑狼瘡的第一步。此外，抗雙鏈DNA抗體、抗Smith（Sm）抗體等特異性自身抗體的檢測(cè)也非常具有重要的診斷性意義。因此，精確識(shí)別特定的自身抗體對(duì)于診斷和治療至關(guān)重要。百泰派克生物科技（BTP）的抗體相關(guān)技術(shù)，特別是在抗體定性定量鑒定和抗體測(cè)序方面，為研究和治療紅斑狼瘡提供了重要的工具。這些技術(shù)不僅有助于識(shí)別和分析導(dǎo)致紅斑狼瘡的自身抗體，還可以提供關(guān)鍵的生物標(biāo)志物，為疾病的診斷和治療提供重要信息。

一、抗體定性定量鑒定

 

百泰派克生物科技使用Thermo Fisher的Q ExactiveHF質(zhì)譜平臺(tái)，Orbitrap Fusion質(zhì)譜平臺(tái)，Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC納升色譜技術(shù)，可對(duì)抗體進(jìn)行精確的定性和定量鑒定。該技術(shù)可用于檢測(cè)和量化血液或其他生物樣本中特定抗體的存在和濃度。通過(guò)這種分析，研究人員可以了解哪些自身抗體與紅斑狼瘡的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，以及它們?cè)诓煌�疾病階段的濃度變化。

圖2. BTP基于質(zhì)譜的蛋白鑒定示例

技術(shù)流程：

 

1.樣本準(zhǔn)備：

 

收集血液或其他生物樣本。通過(guò)離心等方法分離血清或血漿，因?yàn)榭贵w主要存在于這些液體中。

2.樣本處理：

 

抗體提�。簭难�清或血漿中提取總抗體蛋白。
抗體化和濃縮：如果需要，使用免疫親和層析或其他純化技術(shù)進(jìn)一步純化特定抗體。
酶解切割：將抗體蛋白樣品用酶（如胰蛋白酶）處理，生成肽段。
肽段純化：使用固相萃取（SPE）等方法純化肽段。
脫鹽處理：通過(guò)脫鹽柱或其他方法去除樣品中的鹽分。

3.質(zhì)譜分析：

 

液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）聯(lián)用：利用液相色譜對(duì)肽段進(jìn)行分離，并通過(guò)質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)。
數(shù)據(jù)獲�。嘿|(zhì)譜儀通常會(huì)記錄多種肽段的質(zhì)荷比（m/z）和強(qiáng)度信息。

4.數(shù)據(jù)分析：

 

定性鑒定：使用質(zhì)譜數(shù)據(jù)與已知的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，以鑒定特定的自身抗體。
定量分析：通過(guò)比較不同樣本中相應(yīng)肽段的相對(duì)強(qiáng)度進(jìn)行定量分析。

二、抗體測(cè)序：

 

抗體測(cè)序技術(shù)能夠確定特定抗體的精確氨基酸序列。這對(duì)于理解抗體如何與自體組織發(fā)生相互作用，導(dǎo)致免疫反應(yīng)異常至關(guān)重要。此外，這一信息對(duì)于開(kāi)發(fā)針對(duì)性的治療方法，如單克隆抗體療法，有著重要意義。BTP基于目前世界上分辨率最高的質(zhì)譜儀器Obitrap Fusion Lumos，結(jié)合豐富的生物信息學(xué)分析經(jīng)驗(yàn)，建立了全新一代抗體測(cè)序平臺(tái)，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)抗體一級(jí)結(jié)構(gòu)快速準(zhǔn)確的分析。該平臺(tái)適用于不同亞型抗體（例如IgG和IgM）和不同類型抗體（熒光偶聯(lián)抗體，固定化抗體，不同物種的抗體）的序列分析。

圖3. BTP抗體測(cè)序示意圖

技術(shù)流程：

 

1.抗體分離：

 

從血液或細(xì)胞培養(yǎng)中提取抗體。

2.蛋白質(zhì)消化：

 

將抗體蛋白質(zhì)分解成較小的肽段。

3.質(zhì)譜分析：

 

使用質(zhì)譜技術(shù)（如串聯(lián)質(zhì)譜）對(duì)這些肽段進(jìn)行分析，確定它們的質(zhì)量。

4.氨基酸序列確定：

 

根據(jù)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，使用生物信息學(xué)工具重建氨基酸序列。

百泰派克生物科技抗體測(cè)序服務(wù)，能夠?qū)�抗體全長(zhǎng)序列，可變區(qū)氨基酸序列進(jìn)行分析，為客戶獲取抗體的輕鏈和重鏈的完整序列信息。

抗體全序列分析：優(yōu)化的高分辨率質(zhì)譜工作流程和一流的抗體從頭測(cè)序軟件可確保整個(gè)抗體序列從n端到c端進(jìn)行測(cè)序全序列分析；
無(wú)與倫比的準(zhǔn)確性：序列中每個(gè)氨基酸的識(shí)別均由多個(gè)肽段的多個(gè)MS/MS質(zhì)譜數(shù)據(jù)中的信號(hào)推導(dǎo)得到；
廣泛的適用性：該技術(shù)適用于所有抗體類型（IgG、IgA、IgM、IgY、Fab、ScFv等）和物種（人、小鼠、大鼠、兔、倉(cāng)鼠等）。百泰派克還可以對(duì)綴合和污染的蛋白質(zhì)以及具有兩條不同輕鏈的抗體進(jìn)行測(cè)序。鼠源和人源抗體進(jìn)行抗體序列分析后，可以保證合成抗體的活性；
高通量：無(wú)論您僅要測(cè)序一種抗體還是數(shù)百種抗體，百泰派克生物科技抗體測(cè)序服務(wù)均可實(shí)現(xiàn)。

通過(guò)這些技術(shù)，百泰派克生物科技不僅能夠幫助科學(xué)家更深入地了解紅斑狼瘡的免疫機(jī)制，還能為開(kāi)發(fā)新的治療方法提供支持。例如，了解特定自身抗體的結(jié)構(gòu)和功能，有助于設(shè)計(jì)針對(duì)性更強(qiáng)、副作用更少的治療藥物。