JQ1抑制劑-MCE(MedChemExpress)
(+)-JQ-1 (JQ1) 是一種有效特異性的可逆 BET bromodomain 抑制劑，抑制 BRD4(1/2) 的 IC50 分別為 77 nM 和 33 nM。(+)-JQ-1 激活自噬 (autophagy)
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生物活性
體外研究
(+)-JQ-1 代表溴結(jié)構(gòu)域 BET 家族的一種有效、高度特異性和 Kac 競爭性抑制劑。(+)- JQ-1 (100 nM，48 h) 促進鱗狀分化，表現(xiàn)為細胞紡錘形、扁平化和角蛋白表達增加。與 (-)-JQ1 (250 nM) 和載體對照相比，(+)-JQ-1 (250 nM) 在經(jīng)處理的 NMC 797 細胞中誘導(dǎo)角蛋白的快速表達，如通過定量免疫組織化學(xué)所確定的。(+)-JQ-1 (與 (-)-JQ1 (250 nM) 相比) 會引發(fā)經(jīng)處理的 NMC 797 細胞的時間依賴性強 (3+) 角蛋白染色[1]。添加 (+)-JQ-1 后幾乎立即觀察到自噬基因的去抑制[2]。(+)-JQ-1 是 BET 家族共激活蛋白 BRD4 的一種有效的噻吩二氮卓抑制劑 (Kd=90 nM)，通過 MYC 致癌基因的轉(zhuǎn)錄控制參與癌癥的發(fā)病機制。(+)-JQ-1 的劑量范圍研究證明有效抑制 H4Kac4 結(jié)合，小鼠 BRDT (1) 的 IC50 值為 10 nM，人 BRDT (1) 的 IC50 值為 11 nM[3]。
體內(nèi)研究
已確定腫瘤的匹配小鼠隊列隨機接受 (+)-JQ1 (50 mg/kg) 或載體處理，每日腹膜內(nèi)注射。在隨機化之前和處理四天之后，通過 FDG-PET 成像評估小鼠。(+)-JQ1 處理觀察到 FDG 攝取顯著減少。腫瘤體積測量證實 JQ1 處理可減少腫瘤生長。(+)-JQ1 的藥代動力學(xué)研究是在 CD1 小鼠靜脈內(nèi)和口服給藥后進行的。靜脈內(nèi)給藥 (5 mg/kg) 后 (+)-JQ1 的平均血漿濃度-時間曲線。靜脈內(nèi) (+)-JQ1 的藥代動力學(xué)參數(shù)顯示出出色的藥物暴露 (AUC=2090 hr*ng/mL) 和大約一小時的半衰期 (T1/2)。制定口服給藥 (10 mg/kg) 后 (+)-JQ1 的平均血漿濃度-時間曲線�？诜� (+)-JQ1 的藥代動力學(xué)參數(shù)表現(xiàn)出出色的口服生物利用度 (F=49%)、血漿峰濃度 (Cmax=1180 ng/mL) 和藥物暴露量 (AUC=2090 hr*ng)/mL)[1]。
實驗參考方法
細胞測定
1.細胞系：使用 NUT 中線癌患者細胞系（797 和 11060）。 相關(guān)產(chǎn)品推薦：蛋白酶體抑制劑MG-132作用原理
2.培養(yǎng)條件：
797：在含有 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)。
11060：在含有 10% 胎牛血清的 RPMI 培養(yǎng)。
3.處理方案：
細胞被處理為：
250 nM (+)-JQ1
250 nM (-)-JQ1
等量 DMSO（0.025%）。
4.細胞收集：
在所需時間點，以 500× g 離心 5 分鐘，溫度 4°C，獲取 2×10^6 個細胞。
用 PBS 清洗細胞。
5.固定步驟：
將沉淀重懸于 1 mL 冷 PBS 中。
在輕輕渦旋的同時，將其逐滴加入 9 mL 70% 乙醇中，放入一個 15 mL 聚丙烯離心管中。
將固定的細胞在 -20°C 凍存過夜。
6.離心和清洗：
第二天以 500× g 的速度在 4°C 離心 10 分鐘。
用 3 mL 冷 PBS 清洗細胞。
7.染色過程：
將細胞重懸于 500 μL 溴化丙啶染色溶液中（成分：0.2 mg/mL RNAse A、0.02 mg/mL 溴化丙啶、0.1% Triton-X 在 PBS 中）。
在 37°C 孵育 20 分鐘。
8.數(shù)據(jù)分析：
將樣品轉(zhuǎn)移到冰上，并在 BD FACS Canto II 上進行分析。
生成直方圖，并使用 FlowJo 流式細胞儀分析軟件進行細胞周期分析。
備注：MCE 并未獨立確認這些方法的準確性。僅供參考。
動物給藥方案
小鼠研究
實驗對象：具有腫瘤的小鼠（CD1 雄性，體重 24-29 g）。
治療方案：
隨機分為兩組，接受 (+)-JQ1（50 mg/kg）或載體，通過每日腹腔注射給藥。
額外研究包括：
靜脈尾部注射的單劑量 (+)-JQ1（5 mg/kg）。
口服灌胃研究（10 mg/kg）。
大鼠研究
實驗對象：成年雄性斯普拉格-道利大鼠。
治療方案：
給藥載體或 (+)-JQ1（10 mg/kg），采用 IP 給藥，劑量為體重的 1/100。
監(jiān)測：每日檢查死亡情況；在第 1、3、7、14 和 21 天記錄體重。
治療方案調(diào)整因不良反應(yīng)而改變：
初始 4 天每天給予 50 mg/kg JQ1，之后改為每天 10 mg/kg 兩次，持續(xù)至研究結(jié)束。
終點評估：
完成 3 周治療的動物，評估睪丸質(zhì)量、精子活動性和精子計數(shù)。
睪丸在 Bouin 固定液中固定，以備組織學(xué)分析。
另一半在溫暖的 M16 緩沖液中切碎，用于精子計數(shù)和活動性研究。
備注：MCE 并未獨立確認這些方法的準確性。僅供參考。
參考文獻
[1]. Filippakopoulos P, et al. Selective inhibition of BET bromodomains. Nature. 2010 Dec 23;468(7327):1067-73.
[2]. Sakamaki JI, et al. Bromodomain Protein BRD4 Is a Transcriptional Repressor of Autophagy and LysosomalFunction. Mol Cell. 2017 May 18;66(4):517-532.e9.
[3]. Matzuk MM, et al. Small-molecule inhibition of BRDT for male contraception. Cell. 2012 Aug 17;150(4):673-84.
標簽：
jq1
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