用WMicrotracker Arena系統(tǒng)測定左旋咪唑毒性

左旋咪唑是一種合成驅(qū)蟲藥，廣泛應用于獸醫(yī)學中，用于治療由線蟲引起的寄生蟲感染。作為一種驅(qū)蟲藥，它以線蟲乙酰膽堿離子通道受體為靶點(Martin等)。除了醫(yī)學應用外，左旋咪唑還廣泛應用于各個研究領域，特別是秀麗隱桿線蟲麻痹實驗。它能誘導這些線蟲癱瘓，這對于研究神經(jīng)元功能和肌肉生理學來說是無價的。為了深入了解毒理學實驗，我們在下面舉一個利用這種化合物的例子。研究人員可以利用這個例子作為一個框架，使用不同的可溶性藥物進行他們自己的毒性研究。

材料:
帶蓋6孔板，NGM培養(yǎng)基，M9緩沖液，左旋咪唑-原液:100mM水溶，同步成蟲種群，WMicrotracker Arena設備。

簡易操作：

 
微孔板制備:

• 按照標準程序制備NGM；
• 在加入鹽和膽固醇后將左旋咪唑立即加入55°C的NGM瓊脂溶液中；
• 左旋咪唑片未接種OP50中；
• 制備后兩周內(nèi)可使用，保存在4°C的容器中；
• 測定是在實驗開始前已將模板降到室溫的板上進行的。

 
Protocol步驟:

1，在NGM培養(yǎng)皿中培養(yǎng)同步的成蟲種群(OP50)；
2，用M9緩沖液將蠕蟲從培養(yǎng)皿中取出，轉(zhuǎn)移到15毫升無菌試管中；
3，讓蟲子靜下來。倒入上清液，注意不要擾亂顆粒；
4，用5ml M9緩沖液進行清洗。短暫搖動或翻轉(zhuǎn)管子；
5，重復上述步驟。倒出上清，加入3ml M9緩沖液；
6，數(shù)一式三份，計數(shù)每10ul中蟲數(shù)，計算平均值；
7，制備懸浮液，得到[35蟲/10μl]；
8，將10 μl蟲液轉(zhuǎn)移至6孔板；
9，使用wMicroTracker ARENA觀察蠕蟲活動；

備注:至少進行3次技術重復，至少進行2次生物重復。

實驗結(jié)果如圖所示：

左旋咪唑?qū)�N2運動活性的劑量抑制反應曲線

評價不同濃度左旋咪唑(0µM(對照)、100µM和200µM)的治療效果。在6孔板中，每孔挑選35個年輕成蟲N2。在23℃下記錄4小時的運動活動。數(shù)據(jù)代表四個獨立實驗的平均值，進行重復實驗。

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