細胞傳代出現抱團生長的原因及相對應解決方法

經常會聽到小伙伴們問：

細胞傳代時候會大量抱團，不是單個細胞，是什么原因?是消化過度了還是消化不完全?

細胞消化不成單個細胞，出現抱團現象，怎么處理？

細胞抱團生長，這種狀態(tài)正常嗎？

細胞成團生長且生長緩慢？該怎么辦？

我們做細胞實驗的時候經常會碰到細胞抱團的現象，有些時候細胞抱團對我們下一步實驗沒什么影響，但是當影響實驗的時候就簡直抓狂。當檢測細胞克隆形成率、鋪單克隆以及電轉等，這時候細胞要是抱團了，得到的結果基本上都是不可靠的，那么細胞為什么會抱團呢？又該如何避免？接下來就一次性給小伙伴們講清楚吧！

細胞抱團的原因可能有：

1、消化時間控制不當

• 有些小伙伴們不管什么細胞都消化3分鐘左右，然后用手拍打培養(yǎng)瓶使細胞成片脫落，但有些細胞消化不完全，細胞和細胞之間的連接沒有分開，這個時候就拍打下來很容易造成細胞聚團；
• 也不可消化過度，圓形的細胞容易聚堆，想要通過后面的步驟吹打分開是很難的！

正確做法：培養(yǎng)前充分了解細胞的特性，可向購買細胞的廠家咨詢，也可在網上查詢確定細胞的最佳消化時間。

2、傳代時操作不當

• 傳代時細胞吹打不均勻，沒有將細胞團吹散；
• 吹打太用力造成細胞死亡，細胞死亡釋放的DNA與其他細胞形成黏性的細胞團；
• 細胞離心速度多大或者離心時間過長；
• 細胞長的太滿才進行傳代操作。

正確做法：

• 消化前加入適量緩沖液對細胞進行清洗，清除死亡的細胞團和部分堆疊雜質；
• 消化后吹打時上下左右吹打約10次左右，注意控制力度；
• 確定細胞正確的離心條件，嚴格按條件執(zhí)行；
• 細胞匯合度在80%~90%即可傳代。

3、細胞狀態(tài)不好

細胞狀態(tài)不好以及發(fā)生老化也可能造成細胞抱團。

正確做法：及時換液或者傳代，檢查培養(yǎng)體系是否適合細胞。

4、細胞接種不當

細胞轉移至培養(yǎng)瓶/皿時細胞分布不均勻，或者細胞接種密度過高。

正確做法：

• 細胞轉移至培養(yǎng)瓶后可按倒8字形狀搖勻（即∞）；
• 但對于像96孔板這種小型培養(yǎng)皿，需要在接種前把細胞混勻，接種后不可再搖，否則很容易全部聚集在孔板的中間。若已經接種了發(fā)現不均勻，可用槍頭輕輕吹打混勻；
• 接種前進行細胞計數，按照正確的接種密度接種。