TEPP-46激活劑

　　TEPP-46 (ML-265) 是一種有效，選擇性的丙酮酸激酶 M2 (pyruvate kinase M2; PKM2) 激活劑，AC50 值為 92 nM，對 PKM1，PKL 和 PKR 作用較小或沒有作用。

 

 

 

 

　　體外研究

 

　　TEPP-46和DASA-58激活PKM2的機(jī)制與內(nèi)源性激活劑FBP相似。用TEPP-46或DASA-58預(yù)處理細(xì)胞可防止過磷酸酯誘導(dǎo)的PKM2活性抑制。TEPP-46還能誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)乙酰輔酶a、乳酸、磷酸核糖和絲氨酸水平的降低。TEPP-46抑制lps誘導(dǎo)的Hif-1α和IL-1β，以及一系列其他Hif-1α依賴基因的表達(dá)。TEPP-46處理顯著下調(diào)M1標(biāo)記物Il12p40和Cxcl-10的表達(dá)。使用TEPP-46激活PKM2可顯著抑制FSL-1和cpg誘導(dǎo)的Il1b mRNA表達(dá)。TEPP-46抑制mtb誘導(dǎo)的Il1b mRNA水平，提高mtb誘導(dǎo)的Il10 mRNA水平，對Tnf水平無影響。

 

　　體內(nèi)研究

 

　　TEPP-46具有良好的口服生物利用度，清除率相對較低，半衰期較長，分布體積好，這些參數(shù)可預(yù)測腫瘤組織中的藥物暴露。150 mg/kg的TEPP-46在A549異種移植腫瘤中很容易達(dá)到PKM2激活的最大值。

 

 

　　細(xì)胞試驗(yàn)

 

　　在治療開始前24小時(shí)將2000個(gè)細(xì)胞接種于96孔板中。CellTiter96?水溶液用于評估氧化劑和PKM2激活劑聯(lián)合處理后的細(xì)胞活力。MTS:(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)- 2h -四氮唑)。

 

　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

　　將組成表達(dá)小鼠PKM1 cDNA的H1299親本細(xì)胞和H1299-PKM1細(xì)胞(H1299-PKM1細(xì)胞)在添加10%胎牛血清、2 mM谷氨酰胺和濕霉素的RPMI中繁殖，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因選擇。收集細(xì)胞，在無菌PBS中重懸，將5×105細(xì)胞皮下注射到nu/nu小鼠中。用卡尺測量監(jiān)測腫瘤生長情況，在指定時(shí)間后處死小鼠并收獲腫瘤。對腫瘤進(jìn)行稱重、分割，或者在液氮中快速冷凍，或者在福爾馬林中固定以供以后分析。