Rhod-2AM線粒體鈣信號(hào)熒光探針的優(yōu)勢(shì)、應(yīng)用及使用技巧

Rhod-2AM 是一種常應(yīng)用于細(xì)胞鈣離子檢測的熒光探針，尤其在 線粒體鈣信號(hào)（Mitochondrial Ca²⁺ Signaling） 研究中具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，在細(xì)胞生物學(xué)研究中發(fā)揮著重要作用。
 
1.為什么選擇 Rhod-2AM 研究線粒體鈣？
高靈敏度：對(duì)低濃度 Ca²⁺（~nM-μM 范圍）響應(yīng)靈敏。
線粒體靶向性：優(yōu)于其他鈣探針（如 Fluo-4、Fura-2），減少胞質(zhì)信號(hào)干擾。
雙模式檢測：適用于熒光顯微鏡（實(shí)時(shí)成像）和流式細(xì)胞術(shù)（群體分析）。
多通道兼容性：可與綠色熒光探針（如Fluo-4 AM）或藍(lán)色核染料（如Hoechst）聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)多參數(shù)分析。
 
2.應(yīng)用場景示例
線粒體鈣與細(xì)胞凋亡：檢測凋亡刺激（如 STS）下線粒體鈣超載與 mPTP 開放的關(guān)系。
能量代謝研究：結(jié)合 Seahorse 分析儀，關(guān)聯(lián)鈣信號(hào)與 OXPHOS 效率。
神經(jīng)元活動(dòng)：研究突觸后線粒體鈣瞬變（如與電生理聯(lián)用）。
 
3.使用技巧與注意事項(xiàng)
3.1優(yōu)化染色條件
A.細(xì)胞密度：建議1X105 cells/mL，避免過度擁擠影響染料加載。
B.孵育時(shí)間：30-45分鐘（37℃），過長可能導(dǎo)致染料外排或細(xì)胞毒性。
 
3.2干擾因素控制
A. 避免使用含血清培養(yǎng)基（酯酶活性干擾），加載后徹底清洗減少背景信號(hào)。
B. 線粒體膜電位崩潰劑（如CCCP）可驗(yàn)證染料定位特異性。
 
3.3數(shù)據(jù)分析： 
使用比率法（如與TMRM聯(lián)用）校正膜電位變化對(duì)熒光強(qiáng)度的影響。

圖示：

細(xì)胞內(nèi)游離 Ca2+ 通過紅色熒光探針Rhod-2 AM進(jìn)行檢測。細(xì)胞核用 DAPI（藍(lán)色）染色。攜帶 eGFP 報(bào)告基因的 pEZ-LV203 載體產(chǎn)生了綠色熒光蛋白。