Avi-Tag高精度生物素化標(biāo)記技術(shù)的原理、優(yōu)勢(shì)及分子互作研究中的應(yīng)用

蛋白標(biāo)簽
蛋白質(zhì)作為生命活動(dòng)的核心執(zhí)行者，其結(jié)構(gòu)與功能異常與絕大多數(shù)疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。然而，針對(duì)特定蛋白質(zhì)的深入研究一直面臨著重大技術(shù)挑戰(zhàn)。在這一背景下，蛋白標(biāo)簽技術(shù)（Protein tag）應(yīng)運(yùn)而生，為蛋白質(zhì)研究提供了革命性的解決方案。

傳統(tǒng)蛋白質(zhì)檢測(cè)主要依賴免疫分析方法，包括蛋白質(zhì)印跡（Western Blot）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和免疫共沉淀（IP）等。這些方法雖然應(yīng)用廣泛，但存在明顯局限性：每次研究新靶蛋白都需要制備特異性抗體，不僅操作流程繁瑣，而且成本高昂。蛋白標(biāo)簽技術(shù)的出現(xiàn)徹底改變了這一局面，通過將通用標(biāo)簽與目標(biāo)蛋白融合表達(dá)，實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化和便捷化。

蛋白標(biāo)簽技術(shù)是指通過基因工程手段，將具有特定功能的多肽序列、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域或完整蛋白與目標(biāo)蛋白進(jìn)行融合表達(dá)的技術(shù)體系。該技術(shù)不僅能實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的高效檢測(cè)，還可用于蛋白質(zhì)純化、定位追蹤等多種研究應(yīng)用。目前，融合標(biāo)簽技術(shù)已成為現(xiàn)代蛋白質(zhì)研究中不可或缺的重要工具，大大提升了科研工作的效率和可靠性。

Avi Tag
生物素連接酶（Biotin ligase）是由大腸桿菌BirA基因編碼的雙功能蛋白質(zhì)，具有獨(dú)特的分子識(shí)別特性。該酶不僅能特異性識(shí)別蛋白質(zhì)分子中的特定氨基酸序列，催化生物素與靶蛋白的共價(jià)結(jié)合，還可作為轉(zhuǎn)錄阻遏蛋白調(diào)控生物素合成相關(guān)操縱子的表達(dá)。

Avi Tag標(biāo)記技術(shù)正是基于這一原理發(fā)展而來的蛋白質(zhì)標(biāo)記方法。該技術(shù)利用生物素連接酶的酶促反應(yīng)特性，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白的特異性生物素標(biāo)記。作為一種多功能短肽標(biāo)簽，Avi Tag可廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)固定化、純化分離及顯影檢測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域。

從技術(shù)原理來看，Avi Tag通過在目標(biāo)蛋白的N端或C端融合一段由15個(gè)氨基酸組成的短肽標(biāo)簽，該標(biāo)簽可被生物素連接酶BirA特異性識(shí)別并催化生物素共價(jià)連接。這種定點(diǎn)標(biāo)記方式不僅實(shí)現(xiàn)了蛋白質(zhì)的特異性生物素化，更重要的是顯著提高了親和素-生物素系統(tǒng)的結(jié)合特異性和親和力。目前，該技術(shù)已在蛋白質(zhì)純化、蛋白質(zhì)相互作用篩選、熒光標(biāo)記等研究領(lǐng)域展現(xiàn)出重要應(yīng)用價(jià)值。

Avi Tag的技術(shù)優(yōu)勢(shì)
無論在體外或者體內(nèi)，幾乎所有的蛋白都可以在一個(gè)獨(dú)特的Avi Tag位點(diǎn)輕易且有效地被生物素化；
生物素化是通過酶和底物的反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)，反應(yīng)條件相當(dāng)溫和而且標(biāo)記的專一性極高；
生物素AviTag只有15個(gè)氨基酸，對(duì)蛋白空間結(jié)構(gòu)的影響非常小。

杭州斯達(dá)特 (www.starter-bio.com)志在為全球生命科學(xué)行業(yè)提供優(yōu)質(zhì)的抗體、蛋白、試劑盒等產(chǎn)品及研發(fā)服務(wù)。依托多個(gè)開發(fā)平臺(tái)：重組兔單抗、重組鼠單抗、快速鼠單抗、重組蛋白開發(fā)平臺(tái)（E.coli,CHO,HEK293,InsectCells）,已正式通過歐盟98/79/EC認(rèn)證、ISO9001認(rèn)證、ISO13485。