抗豬鏈球菌( SS)單克隆抗體的來源、制備與應用
瀏覽次數(shù):171 發(fā)布日期:2025-6-23
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一、豬鏈球菌(SS)毒株型號與抗原靶點
豬鏈球菌血清型眾多(已知 35 個血清型,以 1、2、7、9 型為主),其中2 型(SS2) 是最常見的致病型,也是單克隆抗體研發(fā)的主要目標。常見毒株型號及抗原靶點如下:
1. 經典毒株與流行株
參考毒株:SS2 型的 P1/7(國際標準株)、05ZYH33(中國高致病性分離株)、98HAH12(臺灣分離株)。
臨床流行株:根據(jù)地域不同,如中國近年流行的 ST7 型、ST28 型 SS2 株,歐洲流行的 ST1 型 SS2 株,mAb 需針對其特異性抗原。
2. 抗原靶點
莢膜多糖(CPS):血清型分型的關鍵抗原,mAb 可特異性識別不同血清型的莢膜結構(如 SS2 型 CPS),用于分型診斷。
表面蛋白:
MRP(毒力相關膜蛋白):SS2 型的主要毒力因子,mAb 可靶向其保守區(qū)域,用于中和毒力或檢測。
EF(延伸因子):高度保守的表面蛋白,mAb 可用于廣譜檢測不同血清型。
Sao 蛋白(鏈球菌表面蛋白 A):部分毒株(如 SS2)表達的黏附蛋白,可作為 mAb 的特異性靶點(注:用戶提到的 “SAO” 可能指此蛋白)。
二、抗體相關參數(shù)
1. 抗體亞型與純度
亞型:以小鼠來源 mAb 為例,常見亞型為 IgG1(如針對 CPS 的 mAb)、IgG2a(如針對 MRP 的 mAb),少數(shù)為 IgM(初免反應)。
純度:通過 Protein A/G 親和層析純化后,純度≥95%,適用于免疫檢測或中和實驗。
2. 效價與特異性
效價:
細胞培養(yǎng)上清液效價:ELISA 法測定通常為 1:128~1:512。
小鼠腹水效價:可達 1:10⁴~1:10⁵(如針對 SS2 型 MRP 的 mAb 腹水效價可>1:5×10⁴)。
特異性:
血清型特異性:抗 SS2 型 CPS 的 mAb 僅識別 SS2 型,與其他血清型(如 SS1、SS9)無交叉反應。
種屬特異性:與其他豬病原微生物(如豬肺炎支原體、大腸桿菌等)無交叉反應,需通過交叉 ELISA 或免疫熒光驗證。
三、制備方法與特異性保障
1. 制備流程(以 SS2 型 Sao 蛋白 mAb 為例)
抗原制備:
表達純化 Sao 蛋白(重組蛋白或天然蛋白),或使用滅活的 SS2 型全菌作為抗原(需確認 Sao 蛋白的表達活性)。
動物免疫:
免疫 6~8 周齡 BALB/c 小鼠,腹腔注射抗原(佐劑為弗氏完全 / 不完全佐劑),間隔 2 周免疫 3 次,末次免疫后 3 天取脾細胞。
細胞融合與篩選:
脾細胞與 SP2/0 骨髓瘤細胞按 4:1 比例融合,HAT 培養(yǎng)基篩選雜交瘤細胞。
通過間接 ELISA 篩選陽性克。阂 Sao 蛋白包被板,檢測細胞上清液的結合活性;進一步通過免疫熒光(IFA) 檢測 mAb 與 SS2 感染細胞的結合,或western blot(WB) 驗證對 Sao 蛋白的特異性識別。
克隆化與生產:
有限稀釋法克隆化雜交瘤細胞,直至單克隆穩(wěn)定(3 次克隆化)。
腹水制備(腹腔注射 Pristane 預處理的小鼠)或無血清培養(yǎng),純化后經 0.22μm 濾膜除菌,-20℃保存。
2. 特異性保障措施
抗原純化:使用重組 Sao 蛋白作為抗原,避免全菌抗原中的其他蛋白干擾,確保 mAb 靶向 Sao 蛋白。
多輪篩選:
通過競爭 ELISA驗證 mAb 與 Sao 蛋白的結合特異性(如加入過量 Sao 蛋白抑制結合)。
通過交叉反應實驗:用 SS1、SS9 型全菌或其他豬病原微生物(如豬鏈球菌其他血清型、金黃色葡萄球菌等)與 mAb 孵育,確認無交叉反應。
四、應用領域與典型場景
病原檢測與分型:
ELISA 試劑盒:抗 SS2 型 CPS 的 mAb 用于血清型鑒定,抗 Sao 蛋白 mAb 用于臨床樣本(如腦脊液、組織勻漿)中 SS2 的定量檢測。
免疫熒光(IFA):標記 FITC 或 TRITC 的 mAb,直接檢測組織切片或培養(yǎng)細胞中的 SS2 菌體,輔助病理診斷。
膠體金試紙條:基于抗 Sao 蛋白 mAb 的免疫層析技術,快速檢測豬鼻腔分泌物、血液中的 SS2。
毒力機制與治療研究:
抗 MRP 或 Sao 蛋白的 mAb 可中和細菌黏附宿主細胞的能力,用于體外毒力抑制實驗,或作為被動免疫制劑的候選(如仔豬被動免疫)。
疫苗研發(fā)與效力評價:
mAb 可用于評估疫苗誘導的抗體應答(如檢測免疫豬血清中針對 CPS 或 Sao 蛋白的抗體水平),或作為陽性對照驗證疫苗抗原表位。
五、商業(yè)化產品與研究實例
美國 ATCC 相關抗體:抗 SS2 型 P1/7 株的 mAb(如克隆號 1G5),靶向 CPS,用于血清學分型。
國內研究實例:中國農業(yè)科學院研發(fā)的抗 SS2 型 05ZYH33 株 Sao 蛋白 mAb(如克隆號 3C6),可特異性識別 ST7 型流行株,中和活性 IC₅₀=10 μg/mL(體外抑菌實驗)。
六、注意事項
血清型差異:豬鏈球菌不同血清型的抗原性差異顯著,mAb 需針對目標血清型(如 SS2),廣譜 mAb 通常靶向保守蛋白(如 EF、P60)。
應用場景適配:
診斷用 mAb:優(yōu)先選擇針對保守抗原(如 EF、P60)的廣譜 mAb,或針對特定血清型 CPS 的分型 mAb。
中和用 mAb:需篩選針對毒力因子(如 MRP、Sao)且具有高中和活性的 mAb。
保存與使用:mAb 避免反復凍融,長期保存需在 - 80℃,工作液可加入 0.1% BSA 防止蛋白降解。