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適用產(chǎn)品 CTLC-ABC細胞凍存液 操作流程如下
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PBMC 的冷凍保存
冷凍時必須考慮每種細胞類型的細胞滲透性、試劑毒性和冷卻速率。 DMSO 引起的滲透壓（超過 DMSO 的固有毒性）是成功冷凍和解凍 PBMC 需要控制的主要因素之一。維持細胞的代謝活性很重要，這樣它們就可以補償滲透壓和膜脂流動性。所有試劑均應(yīng)在室溫下使用（最好在 37° C）。
冷凍時必須考慮每種細胞類型的細胞滲透性、試劑毒性和冷卻速率。 DMSO 引起的滲透壓（超過 DMSO 的固有毒性）是成功冷凍和解凍 PBMC 需要控制的主要因素之一。維持細胞的代謝活性很重要，這樣它們就可以補償滲透壓和膜脂流動性。所有試劑均應(yīng)在室溫下使用（最好在 37° C）。
準(zhǔn)備：
1. 通過將 CTL-Cryo™B 緩慢添加到 CTL-Cryo(™A.（CTL-Cryo™B 含有 DMSO 作為成分，請參閱隨附的 SDS。）通過 0.22μm 過濾器過濾 CTL-Cryo™A-B。
2. 如果將 CTL-Cryo™B 添加到 CTL Cryo™A 并且過濾后在 35-37° C 下沒有生成 CTL-Cryo
2. 如果將 CTL-Cryo™B 添加到 CTL Cryo™A 并且過濾后在 35-37° C 下沒有生成 CTL-Cryo
™A-B 混合物，則將 CTLCryo™A-B 混合物和 CTL -在 37° C CO2培養(yǎng)箱中冷凍™C。 （建議在 Ficoll®梯度運行時開始此步驟）。
3. 每個冷凍管應(yīng)包含大約 10-15x106。每管冷凍更多細胞可能會導(dǎo)致細胞損失。根據(jù)預(yù)期的細胞計數(shù)（預(yù)計每毫升抽取的血液有 1-2x106PBMC）標(biāo)記每個樣品的適當(dāng)數(shù)量的冷凍管。
洗滌后：
1. Ficoll®純化和洗滌后，將 PBMC 重懸于溫?zé)岬?CTL-Cryo™C 中，將細胞濃度調(diào)整至 20x10
1. Ficoll®純化和洗滌后，將 PBMC 重懸于溫?zé)岬?CTL-Cryo™C 中，將細胞濃度調(diào)整至 20x10
6/ml（或預(yù)期最終濃度的兩倍）。
2. 不使用移液器，輕敲管子輕輕混合細胞，避免形成泡沫！
3. 在大約兩分鐘的時間內(nèi)，慢慢地將等體積的溫 CTL-Cryo™A-B 混合物添加到含有 PBMC 的 CTL-Cryo™C 中。 （逐滴添加 CTL-Cryo™A-B 混合，同時輕輕旋轉(zhuǎn)試管，以確保兩種溶液完全混合。）
4. 將含有 PBMC 的 CTL-Cryo™A-B-C 懸浮液等分到預(yù)先標(biāo)記的冷凍管中。輕輕緩慢地移液以盡量減少剪切力；不要嘗試用移液器進行額外的混合。
5. 將冷凍管放入裝有丙醇的室溫 Nalgene®冷凍容器 (Mr. Frosty) 中，并轉(zhuǎn)移到 -80° C 冰箱中至少 12 小時。在此期間請勿打開冰箱。使用專用的-80° C冷凍柜，以防止樣品因打開冷凍柜而搖晃或冷凍柜溫度波動。
6. 當(dāng)細胞立即轉(zhuǎn)移到冷凍容器中的冷凍管并轉(zhuǎn)移到 -80° C 冰箱中時，可以看到最佳的功能和活力。
7. 至少 12 小時且不超過 48 小時后，將冷凍管轉(zhuǎn)移至蒸氣/液氮罐中進行儲存
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