端粒酶活性檢直接檢測(cè)法和間接檢測(cè)法的優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比

端粒酶活性和催化亞基hTERT基因表達(dá)量作為重要的腫瘤標(biāo)志物，與90%惡性腫瘤呈正相關(guān)，可應(yīng)用于干細(xì)胞成瘤性快檢。中檢院在進(jìn)行干細(xì)胞制品質(zhì)量復(fù)核時(shí)，也是進(jìn)行端粒酶活性檢查，采用端粒酶活性（TRAP法）和hTERT基因表達(dá)量的方法，這兩種方法的檢測(cè)結(jié)果是一致的。   
1. 直接檢測(cè)法（如TRAP法及其衍生技術(shù)）
優(yōu)點(diǎn)：
直接檢測(cè)端粒酶活性：通過(guò)延伸端粒重復(fù)序列（TTAGGG）來(lái)反映端粒酶的生物學(xué)功能，是端粒酶活性檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。
廣泛應(yīng)用：TRAP法是經(jīng)典方法，經(jīng)過(guò)多年優(yōu)化（如RQ-TRAP、TRAP-ELISA等），在科研和臨床中有較多文獻(xiàn)支持。
缺點(diǎn)：
操作復(fù)雜：需抽提蛋白、端粒酶延伸反應(yīng)、PCR擴(kuò)增（QPCR/電泳/雜交）等多步驟，耗時(shí)耗力，技術(shù)難度高。
穩(wěn)定性差：樣本處理（如蛋白提�。┮讓�(dǎo)致端粒酶失活，影響結(jié)果可靠性。
靈敏度與特異性不足：SYBR Green法引物特異性較差，易產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增；ELISA法重復(fù)性不佳，易受干擾；低豐度樣本（如少量腫瘤細(xì)胞）檢測(cè)受限。
2. 間接檢測(cè)法（如hTERT基因表達(dá)檢測(cè)，Biowing試劑盒為代表）
優(yōu)點(diǎn)：
操作簡(jiǎn)便：無(wú)需蛋白提取和延伸反應(yīng)，直接檢測(cè)hTERT mRNA表達(dá)，步驟少、耗時(shí)短。
高靈敏度與穩(wěn)定性：雙色熒光TaqMan探針?lè)ㄌ禺愋詮?qiáng)，優(yōu)于SYBR Green；兩套檢測(cè)系統(tǒng)信號(hào)放大，靈敏度更高（尤其對(duì)低表達(dá)樣本）；結(jié)果重復(fù)性好，受樣本處理影響小。
配套完善：提供陽(yáng)性和陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品，支持定性和定量分析。
技術(shù)成熟：適用于高通量篩查。
缺點(diǎn)：
間接反映活性：依賴PCR技術(shù)，需嚴(yán)格防止RNA降解。
總結(jié)對(duì)比