使用MANTIS液體處理器在高內(nèi)涵、基于初級(jí)神經(jīng)元的篩選平臺(tái)中分配細(xì)胞

介紹:
突觸連接的改變與幾乎所有的腦部疾病有關(guān)。尤其是，突觸丟失是破壞認(rèn)知功能的腦部疾病的一個(gè)特別嚴(yán)重的問題，例如精神分裂癥和阿爾茨海默病。高內(nèi)涵、基于初級(jí)神經(jīng)元的篩選平臺(tái)作為研究計(jì)劃的一部分已被研發(fā)出來，其旨在發(fā)現(xiàn)引發(fā)神經(jīng)連接數(shù)量增加的新機(jī)制以作為對(duì)抗這些疾病的策略，同時(shí)促進(jìn)引發(fā)突觸連接數(shù)量增加的新化學(xué)探針的研發(fā)。這些探針將作為未來幾代治療各種腦部疾病藥物的開發(fā)平臺(tái)。

作為高內(nèi)涵篩選平臺(tái)的一部分，為了確保批次間結(jié)果的可重復(fù)性，必須保證所有細(xì)胞接種一致，并且在實(shí)驗(yàn)期間保持細(xì)胞活性。本應(yīng)用說明介紹了一個(gè)實(shí)驗(yàn)程序，強(qiáng)調(diào)了MANTIS® 液體處理器作為一種精確、可靠和強(qiáng)大的解決方案的適用性，即使是最敏感的原代神經(jīng)元細(xì)胞也可以進(jìn)行分配。

材料: 

1x PDL 涂層 1536 孔 Aurora 微孔板

50 mL 培養(yǎng)基，含有:

•  1X Neurobasal-A 培養(yǎng)基

•  2.5% Glutamax-I

•  02% Gentamicin 試劑 

•  2% B-27 補(bǔ)充劑

•  10 uM FUDR

從 P0 小鼠幼崽中提取的5x106 個(gè)原代皮層細(xì)胞 

FORMULATRIX® MANTIS 液體處理器

Eppendorf 5810 R 離心機(jī)

GE IN Cell Analyzer 6000 基于激光的共聚焦成像平臺(tái)

方法:

1. 神經(jīng)元細(xì)胞在 1536 孔 Aurora 微孔板上接種

2. 將含有 3 x 103 個(gè)細(xì)胞的 15 μL 培養(yǎng)基分配到 1536 個(gè)孔中的每個(gè)孔中

3. 將微孔板在 200 g 離心力下離心 1 分鐘

4. 細(xì)胞在不飼養(yǎng)的情況下培養(yǎng) 7 天 

5. 使用 IN Cell Analyzer 6000 通過 DIV7 Phase Contrast 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)

結(jié)果:

培養(yǎng) 7 天后，平均相細(xì)胞計(jì)數(shù)與 96 或 384 孔板相當(dāng)，整個(gè) 1536 孔板的細(xì)胞計(jì)數(shù)均勻性 CV 小于 10%。

圖 1. 1536 孔 Aurora 微孔板單孔中的原代神經(jīng)元細(xì)胞

總結(jié):
即使是分配至小體積的 1536 孔板，F(xiàn)ormulatrix MANTIS 也能夠一致地分配細(xì)胞。此外，通過使用溫和、低剪切力的分配技術(shù)，該儀器可延長(zhǎng)體外細(xì)胞活性。

致謝: 

這項(xiàng)工作是由佛羅里達(dá)州木星斯克里普斯研究所的 Chris Hubbs 完成的。斯克里普斯研究所 (TSRI) - 世界上最大的私人非營(yíng)利研究機(jī)構(gòu)之一——站在基礎(chǔ)生物醫(yī)學(xué)科學(xué)的前沿，是醫(yī)學(xué)研究的重要組成部分，旨在理解生命的最基本過程。在過去的幾十年中，該研究所對(duì)為健康和人類狀況改善做出重大貢獻(xiàn)方面進(jìn)行了長(zhǎng)期的記錄。