細胞生物學：細胞增殖實驗技術服務(MTT實驗技術服務)

MTT原理：MTT分析法以活細胞代謝物還原劑3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑藍為基礎。MTT為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料，可作用于活細胞線粒體中的呼吸鏈，在琥珀酸脫氫酶和細胞色素C的作用下tetrazolium環(huán)開裂，生成藍色的formazan結晶，formazan結晶的生成量僅與活細胞數(shù)目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。

MTT步驟如下：
1.接種細胞：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個細胞接種到96孔板，每孔體積200ul.
2.培養(yǎng)細胞：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據試驗目的和要求決定培養(yǎng)時間）。
3.呈色：培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.
繼續(xù)孵育4小時，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內培養(yǎng)上清液，對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結晶物充分融解。
4.比色：選擇490nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。
 

客戶需提供: 樣本描述,相關的實驗設計內容如作用時間和樣本濃度等。 

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