分子生物學(xué)：RT-PCR實(shí)驗(yàn)服務(wù)（逆轉(zhuǎn)錄PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)）

反轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse transcriptase PCR,RT-PCR）是一種從RNA擴(kuò)增cDNA拷貝的方法。RT-PCR對(duì)于獲得與克隆mRNA的5’、3’末端序列和從非常少量的mRNA樣品構(gòu)建大容量的cDNA文庫(kù)方面都是極為靈敏與通用的方法。此外，RT-PCR還易于鑒定已轉(zhuǎn)錄序列是否發(fā)生突變及呈現(xiàn)多態(tài)性，還可用于測(cè)定基因表達(dá)的強(qiáng)度。我公司采用二步RT-PCR法，可滿足客戶不同的實(shí)驗(yàn)要求。

服務(wù)內(nèi)容：
1. 以總RNA或mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
2. PCR擴(kuò)增看家基因檢測(cè)cDNA合成的效率。
3. 目的基因的克隆及測(cè)序。

樣品要求：
1. 如果提供的材料為總RNA，請(qǐng)?zhí)峁┳懔康牟⑶冶ＷC純度的總RNA(濃度500 ng/μl以上，體積20μl以上）。
2. 如果提供的材料為細(xì)胞或組織，應(yīng)保證材料新鮮，動(dòng)物細(xì)胞數(shù)為10⁷以上，動(dòng)物組織為100mg以上。

3. 提供的樣品要新鮮并盡可能多，不推薦提供RNA樣品，或者提供cDNA，并盡可能詳細(xì)的提供背景資料（基因序列、Genebank accession number擴(kuò)增產(chǎn)物的用途等）。

終產(chǎn)品：
實(shí)驗(yàn)報(bào)告（包括實(shí)驗(yàn)方法、照片等）；cDNA；PCR產(chǎn)物。

服務(wù)說(shuō)明：
實(shí)驗(yàn)材料必須保證新鮮，請(qǐng)您采樣后立即放入液氮中速凍。

基本步驟：
● 模板制備：見(jiàn)RNA提取技術(shù)服務(wù)。
● 引物合成：客戶提供上、下游引物，或者我公司提供免費(fèi)的引物設(shè)計(jì)及合成（包括RT-PCR半定量檢測(cè)中的內(nèi)參引物）。
● 反轉(zhuǎn)錄
（1）Microtube管中配制下列模板RNA/引物混合液，全量<15 μl。

42℃保溫1小時(shí)。
（5）70℃保溫15分鐘后冰上冷卻，得到cDNA溶液。
若需要表達(dá)，參考基因表達(dá)服務(wù)。若需要進(jìn)行RT-PCR半定量分析，接著以下的操作。
● RT-PCR半定量分析
PCR擴(kuò)增目的基因及看家基因，產(chǎn)物經(jīng)過(guò)瓊脂糖凝膠電泳后進(jìn)行灰度掃描分析。

實(shí)驗(yàn)具體收費(fèi)、標(biāo)本的收集、實(shí)驗(yàn)試劑的定購(gòu)等事宜，請(qǐng)聯(lián)系嘉美生物。
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