熒光定量技術(shù)服務(wù)-北京凱諾春天生物

 

Real Time PCR法，也就是實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)PCR擴(kuò)增量的方法。因其無(wú)需電泳，且具有快速性及定量性而倍受青睞。 本公司承接利用Real Time PCR法進(jìn)行課題研究的技術(shù)服務(wù)，可從引物設(shè)計(jì)合成開(kāi)始，至Real Time PCR反應(yīng)檢測(cè)的一條龍技術(shù)服務(wù)，歡迎惠顧！

        定性分析

        絕對(duì)定量

        相對(duì)定量（mRNA表達(dá)量分析）

        DNA Microarray數(shù)據(jù)確認(rèn)

        RNAi效果確認(rèn)（siRNA的篩選）

        熒光染料嵌合法（SmartGreen）

以相對(duì)定量為例。

        引物設(shè)計(jì)（免費(fèi)）、合成（客戶自費(fèi)）

        制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。使用設(shè)計(jì)合成的引物，以客戶提供的Total RNA樣品為模板，進(jìn)行Real Time PCR反應(yīng)，確認(rèn)引物模板的反應(yīng)性能。然后將模板進(jìn)行5個(gè)濃度梯度稀釋，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，以供進(jìn)一步定量分析使用。

        Real Time PCR反應(yīng)及定量分析

      對(duì)客戶提供的RNA Sample，進(jìn)行Real Time RT-PCR反應(yīng)，并進(jìn)行定量分析。用相對(duì)定量方法進(jìn)行定量分析時(shí)，如客戶需要，可對(duì)管家基因等參比基因進(jìn)行同樣操作，用所得到的值進(jìn)行RNA量的校正，最后求得目的基因的相對(duì)表達(dá)量。

        定性分析

PCR反應(yīng)結(jié)束后的PCR產(chǎn)物無(wú)需電泳檢測(cè)，可以通過(guò)Real Time PCR方法，簡(jiǎn)單快速地對(duì)目的基因進(jìn)行高特異性、高靈敏度的檢測(cè)，同時(shí)閉管操作的實(shí)時(shí)檢測(cè)可以有效防止反應(yīng)產(chǎn)物的污染。本技術(shù)可以廣泛應(yīng)用于病毒、病原菌等致病微生物的檢測(cè)以及各種生物品種的鑒定等。

        絕對(duì)定量

絕對(duì)定量首先必須構(gòu)建與檢測(cè)樣品目的基因具有相同序列的標(biāo)準(zhǔn)品。使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品制作3個(gè)點(diǎn)以上的標(biāo)準(zhǔn)曲線后，可以使用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知濃度的檢測(cè)樣品進(jìn)行絕對(duì)量（起始拷貝數(shù)）分析。

        相對(duì)定量（mRNA表達(dá)量分析）

基因表達(dá)的研究一般采用相對(duì)定量的方法。相對(duì)定量法必須對(duì)樣品的目的基因和參比基因內(nèi)標(biāo)同時(shí)分別進(jìn)行定量，然后求出對(duì)于參比基因的目的基因的相對(duì)量。通過(guò)對(duì)樣品間的目的基因的相對(duì)量進(jìn)行比較，可以對(duì)不同樣品間的mRNA進(jìn)行表達(dá)量分析。參比基因通常選用表達(dá)量相對(duì)恒定的House Keeping Gene，如：GAPDH、b-actin等。通過(guò)同時(shí)對(duì)參比基因的實(shí)時(shí)檢測(cè)，可以對(duì)樣品之間由于起始細(xì)胞數(shù)不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量誤差進(jìn)行校正，達(dá)到在嚴(yán)格意義上對(duì)樣品之間的mRNA表達(dá)量進(jìn)行分析之目的。

        進(jìn)行mRNA表達(dá)量分析時(shí)，請(qǐng)寄送足量的并且保證純度的Total RNA（濃度在100 ng/ml以上，體積在20ul以上)。如果目的基因表達(dá)量低時(shí)，應(yīng)盡量提供更高濃度的Total RNA。

        如果提供的材料為細(xì)胞或組織，DNA、RNA的提取費(fèi)用另收。同時(shí)應(yīng)保證材料新鮮，動(dòng)物細(xì)胞數(shù)為10⁶以上，動(dòng)植物組織為50mg以上。

        以下技術(shù)服務(wù)價(jià)格是針對(duì)Human、Mouse、Rat等三個(gè)生物物種采用染料嵌合熒光（SmartGreen）法的報(bào)價(jià)。如果是三種生物種以外的物種或采用TaqMan探針?lè)椒〞r(shí)，價(jià)格請(qǐng)具體垂詢!

        以下技術(shù)服務(wù)報(bào)價(jià)是以提純的核酸（即DNA或RNA）為起始材料設(shè)定的，如果需要進(jìn)行核酸純化時(shí)，費(fèi)用另計(jì)。進(jìn)行mRNA表達(dá)量分析，如果提供的total RNA量少或目的基因表達(dá)量低，Total RNA不能作為標(biāo)準(zhǔn)品使用時(shí)，此時(shí)需客戶自行制備標(biāo)準(zhǔn)品。

        以下技術(shù)服務(wù)報(bào)價(jià)為1個(gè)目的基因的報(bào)價(jià)。同一材料的N個(gè)目的基因的價(jià)格=1個(gè)目的基因價(jià)格×N × 0.75。

        如因?qū)嶒?yàn)材料等非本公司原因造成某實(shí)驗(yàn)步驟失敗，使實(shí)驗(yàn)提前終止，已啟動(dòng)的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目仍正常收費(fèi)。