流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)

    1) DNA倍體分析、DNA含量分析、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡。

    2) 細(xì)胞表面抗原分析：淋巴細(xì)胞免疫分型、白血病及淋巴瘤免疫分型、血小板相關(guān)抗體分析、HLA-B27、PNH相關(guān)抗原檢測(cè)（CD55/CD59）、胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)等。

    3) 其它指標(biāo)：細(xì)胞內(nèi)鈣離子測(cè)定、耐藥基因檢測(cè)（p170、MRP、LRP）及凋亡基因（P53、CD95、c-erb B2、Bcl-2及Bax）等。

    1) 單個(gè)細(xì)胞：1~2×10⁶ 個(gè)細(xì)胞左右；來(lái)源于人、小鼠、大鼠等。

    2) 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來(lái)源于人、小鼠、大鼠或其它。

1、  實(shí)驗(yàn)所用的流式細(xì)胞儀為COULTER EPICS XL。

2、  送檢樣本量：

        1)、單個(gè)細(xì)胞：1~2×10⁶ 個(gè)細(xì)胞左右；來(lái)源于人、小鼠、大鼠等。

        2)、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來(lái)源于人、小鼠、大鼠等。

3、  用戶需要進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)須提前預(yù)約，同時(shí)說明實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒎椒ǖ�。一次送檢標(biāo)本數(shù)不少于10個(gè)。如果一次送檢標(biāo)本總數(shù)不足10個(gè)，每個(gè)測(cè)試費(fèi)用為標(biāo)準(zhǔn)收費(fèi)×2。

4、  我公司在正式接受實(shí)驗(yàn)委托一到兩周內(nèi)交付實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所提供實(shí)驗(yàn)結(jié)果忠實(shí)于樣本的實(shí)際情況。

5、  低于5000元用戶須一次性全額預(yù)付實(shí)驗(yàn)費(fèi)，高于5000元，客戶預(yù)付實(shí)驗(yàn)全款的50。

6、  部分常用熒光探針，如PI等，我公司可免費(fèi)提供，；特殊標(biāo)記物，如CD抗體等，用戶須另行購(gòu)買，也可委托我公司代購(gòu)；用戶所提供抗體應(yīng)可與樣本發(fā)生特異性識(shí)別反應(yīng)。

7、  由用戶提供的樣品或試劑所致的實(shí)驗(yàn)問題由用戶負(fù)責(zé)。

8、  請(qǐng)?jiān)诒碇姓f明檢測(cè)具體要求（可另附頁(yè)），由于填寫資料不詳所致任何問題由用戶負(fù)責(zé)。

9、  請(qǐng)?jiān)谒蜆拥耐瑫r(shí)提供樣本來(lái)源及處理方法等信息，樣品檢測(cè)后原則上本公司不負(fù)責(zé)保存。

 

附：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品推薦制備方法：

 

A. 直接標(biāo)記抗體（FITC標(biāo)記抗體）：

    (1) 、收集1×10⁶個(gè)細(xì)胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。

    (2) 、用4多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞，800rpm離心5min。

    (3) 、用1ml含5 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×10⁵個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1 多聚甲醛固定，待測(cè)即可。

    (4) 、用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。

 

B. 未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法：

    (1)、收集2×10⁶個(gè)細(xì)胞，用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次，800rpm離心5min。

    (2)、用2ml 4多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min；2ml PBS重懸細(xì)胞，800rpm離心5min；

    (3)、用1ml含0.2Triton-X100和5血清的PBS重懸細(xì)胞，冰上放置10min,800rpm離心5min。

    (4)、加入飽和劑量未標(biāo)記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min，用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞，800rpm離心5min，洗去未結(jié)合一抗，重復(fù)一次。

    (5)、加入熒光標(biāo)記（FITC）標(biāo)記的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm離心5min，去上清，PBS洗滌兩次。

    (6)、加入0.5ml 1多聚甲醛重懸細(xì)胞；固定待測(cè)。

    (7)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。

 

C.細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備：

    (1)、待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液，然后2000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，棄上清。

    (2)、用4℃預(yù)冷的70冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小時(shí)。

    (3)、調(diào)整細(xì)胞濃度為10⁶細(xì)胞/毫升，取1毫升細(xì)胞懸液，用PBS洗三次，細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。

    (4)、PI染液終濃度為50mg/ml，RNase A終濃度為20ug/ml。

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