熱點(diǎn)實(shí)驗(yàn)服務(wù)：激光共聚焦實(shí)驗(yàn)服務(wù)案例介紹

XXXX原代細(xì)胞干預(yù)培養(yǎng)與激光共聚焦蛋白細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)試劑：PBS(磷酸鹽緩沖液pH7.4)（實(shí)驗(yàn)室常規(guī)配置）；非免疫山羊血清；Triton X-100（sigma）；BSA抗體稀釋液（實(shí)驗(yàn)室常規(guī)配置）；A蛋白抗體（Santa cruz）；B蛋白抗體（Abcam）；Alexa Fluor® 488 donkey anti-goat IgG (H+L)(Invitrogen)；Alexa Fluor® 555 Anti-Rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment(Invitrogen)
上述試劑均由嘉美生物代買。

實(shí)驗(yàn)儀器：激光共聚焦掃描顯微鏡(LeicaTCS-SP5型)

實(shí)驗(yàn)步驟：將細(xì)胞每孔2ml（密度為2*106/L）傳至激光共聚焦專用培養(yǎng)皿；接種24h后，采用刺激物處理；25min后培養(yǎng)皿內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)液，PBS沖洗3次，2-4%甲醛固定15min；1×PBS緩沖液（0.01M，pH7.4）洗滌3次，每次5min，滴加非免疫山羊血清（內(nèi)含0.3%Triton X-100）封閉液,覆蓋液面2-3mm，室溫放置60min，除去多余液體；加A蛋白一抗50μL（1:100），4℃下過夜；PBS洗3次，每次5min，加熒光標(biāo)記的A蛋白二抗 [Alexa Fluor® 488 donkey anti-goat IgG (H+L)] 50μL（1:200），室溫下放置60min；PBS沖洗3次，加B蛋白一抗50μL（1:500）37℃下放置1h，PBS洗3次，每次5min；加熒光標(biāo)記的B蛋白二抗[(Anti-Rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment)] 50μL（1:200），置于室溫下60 min；PBS洗3次，每次5min；激光共聚焦顯微鏡下觀察、拍照，每組照相2張，用MOTIC FLUO1.0生物熒光分析處理軟件將圖片進(jìn)行量化。
實(shí)驗(yàn)分組：刺激物分4組。培養(yǎng)液中刺激物的終濃度：刺激物L(fēng)0.5ng/ml；刺激物S20nM；刺激時(shí)間25分鐘
1組：control（DMEM培養(yǎng)液）
2組：刺激物L(fēng)
3組：刺激物S 
4組：刺激物L(fēng)+S

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

1組：control（DMEM培養(yǎng)液）

2組：刺激物L(fēng)

3組：刺激物S

嘉美生物是一家主要從事Annexin V,信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抗體,重組人和動(dòng)物蛋白,磷酸化抗體,各種動(dòng)物ELISA試劑盒,生物實(shí)驗(yàn)服務(wù)等研發(fā)與銷售的高科技生物公司。

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4組：刺激物L(fēng)+S

實(shí)驗(yàn)咨詢：service@