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adenovirus
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腺病毒包裝：
腺病毒是一種線性雙鏈DNA病毒，由于其具有宿主范圍廣、可感染分裂和非分裂細胞、高滴度制備、外源基因裝載容量大等優(yōu)點，重組腺病毒已越來越廣泛地被應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床試驗中，并成為世界上最常用的基因治療載體之一。
腺病毒包裝的優(yōu)點：
1、可感染的細胞種類多，宿主廣泛；
2、感染效率高，特別適合質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染效率低的細胞，如原代細胞、神經(jīng)細胞等，且目的蛋白表達水平高；
3、可包裝大片段的外源基因，高達10kb；
4、不整合到細胞染色體中，生物安全性高。
腺病毒包裝技術(shù)主要原理是將目的片段克隆到腺病毒表達載體上，表達載體和包裝質(zhì)粒通過重組導(dǎo)入腺病毒包裝細胞進行包裝，包裝好的病毒進一步進行擴增和滴度測定。
科佰生物擁有豐富的病毒包裝經(jīng)驗，成功為很多客戶包裝出需要的病毒。公司提供2種較常用的系統(tǒng)：AdEasy、AdMAX。
AdEasy包裝系統(tǒng)主要的特點是利用Cre/loxP系統(tǒng)在大腸桿菌（BJ5183）中完成外源基因插入腺病毒基因組的過程，獲得環(huán)狀的重組腺病毒基因組，并且具有在細菌中復(fù)制的必需元件。將重組腺病毒基因組酶切線性化后轉(zhuǎn)染HEK293細胞，避免了雙質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染得到重組腺病毒。
使用這個系統(tǒng)需要注意以下問題：
1.要用能表達Cre重組酶的特定的大腸桿菌，建議建立菌種庫以免細菌發(fā)生變化；
2.由于重組是在細菌中發(fā)生的，微小的基因組變化不易發(fā)現(xiàn)；
3.要獲得高品質(zhì)的重組腺病毒毒種（高病毒產(chǎn)量、高目的基因表達）應(yīng)挑選多個重組腺病毒質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)染HEK293細胞，獲得多個重組病毒來篩選。
可根據(jù)不同的研究需求構(gòu)建腺病毒穿梭載體，如用于RNAi的腺病毒載體、用于基因過表達的腺病毒載體、用于啟動子活性研究的腺病毒載體等
AdMax包裝系統(tǒng)是通過Cre/loxP 獲得重組病毒，這個過程發(fā)生在HEK293細胞中，從而避免在細菌中重組。將克隆了外源基因的腺病毒穿梭質(zhì)粒與攜帶了腺病毒大部分基因組的包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細胞，利用Cre/loxP系統(tǒng)的作用實現(xiàn)重組，產(chǎn)生重組腺病毒。這個系統(tǒng)有多種優(yōu)勢，包括操作簡便、重組效率高、獲得的病毒產(chǎn)率高、目的基因的表達水平高（因為mCMV啟動子比hCMV啟動子強若干倍）等。
可根據(jù)不同的研究需求構(gòu)建腺病毒穿梭載體，如用于RNAi的腺病毒載體、用于基因過表達的腺病毒載體、用于啟動子活性研究的腺病毒載體等
技術(shù)流程:
1.獲得目的基因序列；
2.構(gòu)建病毒表達載體質(zhì)粒；
3.表達載體質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒重組；
4.感染HEK293，包裝出病毒；
5.病毒擴增、濃縮；
6.滴度測定。
服務(wù)說明:
1.客戶提供目的基因的序列，如果提供模板，請告知載體、酶切穩(wěn)點等信息；
2.默認使用AdEasy系統(tǒng)，有明確要求請告知；
3.序列過長可能影響病毒滴度；
4.目的蛋白的功能驗證另外收費。
提交的產(chǎn)品和資料:
1.實驗報告；
2.提供至少1ml滴度＞10^10PFU/ml的病毒，特殊基因除外；
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